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武漢原生原代生物醫(yī)藥科技有限公司

腫瘤原代細胞鑒定技術

時間:2021-9-7 閱讀:348
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一、形態(tài)學鑒定
1.        在倒置顯微鏡中直接觀察活細胞的形態(tài)學特征
2.        細胞染色檢查 :
a)        將無菌玻片置于細胞培養(yǎng)皿中,加細胞懸液后培養(yǎng);
b)        待細胞長滿玻片后取出,用PBS清洗,之后放于載玻片上,待其自然干燥;
c)        用PBS/甲醇(1:1)固定15分鐘;
d)        棄固定液,加合適的染色液染色;
e)        染色完畢后用清水洗凈,置于空氣中干燥,
f)         干燥后,用二甲苯透明,光學樹脂封片后觀察。
 
二、免疫組織細胞化學鑒定
1.      將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中,將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片;
2.      PBS清洗標本3次,各1 分鐘;
3.      4%多聚甲醛固定15分鐘;
4.      置于空氣中干燥;
5.      PBS清洗標本3次,各2 分鐘;
6.      0.5%Triton X-100孵育 1次20分鐘;
7.      PBS清洗標本 3次 各2分鐘;
8.      3%H2O2孵育 15分鐘;
9.      DPBS清洗標本 3次 各2 分鐘;
10.    封閉血清孵育(5%正常二抗血清DPBS液20分鐘;
11.    一抗孵育,4℃ 過夜或37℃ 60 分鐘;
12.    PBS清洗標本3次 各5 分鐘;
13.    二抗工作液孵育(濕盒)37℃ 30 分鐘;
14.    PBS清洗標本3次 各5 分鐘;
15.    C液(濕盒) 37℃ 30 分鐘;
16.    PBS清洗標本3次,各5 分鐘;
17.    用顯色液進行顯色;
18.    蒸餾水洗滌2次1 分鐘;
19.    蘇木素復染1分鐘;
20.    清水洗滌30分鐘;
21.    光學樹脂封片后觀察。


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