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譜康醫(yī)學(xué) | 單管檢測(cè)35人份PBMC——大隊(duì)列樣本編碼策略

閱讀:621      發(fā)布時(shí)間:2024-8-9
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譜康醫(yī)學(xué) | 單管檢測(cè)35人份PBMC——大隊(duì)列樣本編碼策略


大隊(duì)列流式樣本編碼策略

在大隊(duì)列流式樣本研究中,為保證樣本間實(shí)驗(yàn)操作的一致性,通常會(huì)先對(duì)每份樣本進(jìn)行barcoding編碼,然后將所有樣本混合成1管,進(jìn)行統(tǒng)一的后期抗體染色等實(shí)驗(yàn)步驟。同批次對(duì)多個(gè)樣本進(jìn)行處理,可節(jié)約抗體等試劑,節(jié)省操作時(shí)間和重復(fù)性操作成本,減少因人工操作和機(jī)器狀態(tài)帶來(lái)的單個(gè)樣本差異性,極大的提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性和準(zhǔn)確性。

本次實(shí)驗(yàn)采用活細(xì)胞barcoding編碼方案,用Cd(111Cd、112Cd、116Cd)和Pt(194Pt、195Pt、196Pt、198Pt)標(biāo)記的CD45作為編碼抗體試劑,從7種同位素中任選3種,以金屬組合編碼的方式標(biāo)記不同細(xì)胞樣本,將樣本編碼上限拓展到了35人份。相比于市面上的20-plex Pd Barcoding編碼需要先對(duì)細(xì)胞進(jìn)行固定破膜,使用活細(xì)胞barcoding編碼可以避免部分抗體在固定破膜后特異性不好、染色效果不佳的缺陷。

本實(shí)驗(yàn)使用譜康醫(yī)學(xué) MSFLO 質(zhì)譜流式細(xì)胞儀分析檢測(cè) 35 人份混合編碼的外周血樣本免疫細(xì)胞。MSFLO 質(zhì)譜流式細(xì)胞儀是先進(jìn)的懸液?jiǎn)渭?xì)胞蛋白檢測(cè)平臺(tái),具備高靈敏、高通量、多靶標(biāo)的單細(xì)胞蛋白組學(xué)檢測(cè)能力,以及溶液、單細(xì)胞、單顆粒等多種工作模式,其強(qiáng)大的算法可實(shí)現(xiàn)多種單細(xì)胞編碼方式的解碼功能。

此外,該編碼方式具備一定的可拓展性,以Cd(7種金屬同位素)和Pt (4種金屬同位素)標(biāo)記的CD45為例,采用11選3方案,最多可進(jìn)行165人份樣本同批次處理與單管上樣,為臨床大樣本隊(duì)列和高通量藥物篩選研究做準(zhǔn)備。

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譜康醫(yī)學(xué) | 單管檢測(cè)35人份PBMC——大隊(duì)列樣本編碼策略應(yīng)用方案
儀器配置
MSFLO 臺(tái)式質(zhì)譜流式細(xì)胞儀

實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
(1)Barcoding 設(shè)計(jì)

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 (2)主要試劑

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結(jié)果分析

通過(guò)算法對(duì)混合樣本進(jìn)行解碼,可有效鑒別35種編碼方式對(duì)應(yīng)的35個(gè)樣本文件,熱圖和tSNE也能進(jìn)一步證實(shí)35個(gè)樣本之間區(qū)分明顯,分離效果優(yōu)秀。

(1)文件解碼

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(2)可視化分析


  • 35個(gè)樣本CD45 histogram


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  • 35個(gè)樣本CD45 heatmap


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  • 35個(gè)樣本tSNE分布


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(3)對(duì)解碼后35個(gè)樣本進(jìn)行CD4/CD8 T cells、B cells、Monocytes和NK cells分群圈門(mén),各細(xì)胞亞群分群效果較好,亞群比例統(tǒng)計(jì)結(jié)果如下:

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解碼后的35個(gè)樣本以CD4/CD8 T細(xì)胞為例的分群效果:


譜康醫(yī)學(xué) MSFLO 質(zhì)譜流式細(xì)胞儀致力于為生命科學(xué)領(lǐng)域提供強(qiáng)大的單細(xì)胞、多靶標(biāo)檢測(cè)技術(shù)手段,滿(mǎn)足單細(xì)胞 40 色及以上檢測(cè)指標(biāo)需求,且通道間基本無(wú)串?dāng)_、無(wú)需調(diào)節(jié)補(bǔ)償,背景信號(hào)低,工作模式豐富,為不同科學(xué)研究領(lǐng)域提供強(qiáng)有力的技術(shù)解決方案。

聚光科技生命科學(xué)板塊旗下杭州譜康醫(yī)學(xué)科技有限公司,成立于2020年,以流式細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)為核心,提供專(zhuān)業(yè)化的硬件及配套試劑,同時(shí)為客戶(hù)開(kāi)發(fā)開(kāi)展定制化服務(wù)。公司堅(jiān)持流式細(xì)胞儀產(chǎn)業(yè)化協(xié)同發(fā)展戰(zhàn)略,擁有高學(xué)歷流式設(shè)備專(zhuān)業(yè)研發(fā)團(tuán)隊(duì),標(biāo)準(zhǔn)化的GMP生產(chǎn)車(chē)間,豐富的實(shí)驗(yàn)室建設(shè)經(jīng)驗(yàn),成熟的實(shí)驗(yàn)室管理體系,已經(jīng)全面掌握流式核心的設(shè)備制造技術(shù)及設(shè)備集成的開(kāi)發(fā)能力,旨在為客戶(hù)提供整套細(xì)胞解決方案。




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