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薄層色譜TLC小知識分享

閱讀：2630 發(fā)布時間：2014-11-6
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薄層色譜TLC小知識

　　1、怎樣提高點(diǎn)樣效率

　　點(diǎn)樣是造成TLC定量誤差的主要來源。實(shí)驗(yàn)證明：定量毛細(xì)管更適合較小體積的點(diǎn)樣；微量注射器更適合較大體積的點(diǎn)樣。這主要是因?yàn)槲⒘孔⑸淦魇苄馀荨⑷芤夯嘏垃F(xiàn)象的影響較大。為避免不同定量毛細(xì)管間的點(diǎn)樣誤差、建議一塊薄層板上用同一只定量毛細(xì)管。但應(yīng)注意更換樣品時，應(yīng)將毛細(xì)管用超聲波或不同極性溶劑清洗干凈。在制備樣品時，溶樣溶劑黏度不能過高，以便于點(diǎn)樣；溶劑沸點(diǎn)過低則進(jìn)樣體積易變，過高則會改變展開劑組成；對樣品溶解度過高會使樣點(diǎn)發(fā)生空心現(xiàn)象；常用的溶劑為甲醇、乙醇、丙酮。經(jīng)典TLC樣點(diǎn)原點(diǎn)一般為直徑3mm點(diǎn)間距1--2cm 底邊距1.5cm；HPLC樣點(diǎn)原點(diǎn)一般為直徑1mm點(diǎn)間距5mm 底邊距1cm。

　　2、展開劑的選擇

　　TLC與HPLC相比，一個突出的優(yōu)點(diǎn)就是流動相的選擇具有更大的靈活性。流動相的選擇的目的是使絕大部分樣品的RF值位于0.1--0.7之間并達(dá)到較好的分離，與此對應(yīng)的是流動相要有適當(dāng)?shù)膹?qiáng)度和組成。流動相強(qiáng)度越大，溶質(zhì)RF值越大，但很可能降低分離能力；另外單一溶劑很難分離較復(fù)雜的混合物，根據(jù)相似相溶原理，要使用多元溶劑體系。一般展開劑體系選擇如下：根據(jù)分離樣品性質(zhì)、薄層色譜板性質(zhì)選擇一個二元溶劑體系，通過調(diào)節(jié)溶劑比例以尋求適合RF值，適合的RF值找到后，再尋求極性參數(shù)相同的二元溶劑體系兩個，以這三個組成為三點(diǎn)組成一個三角形，則可看到：三角形頂點(diǎn)是二元體系，邊是三元體系，三角形內(nèi)是四元體系，并且極性一致，可根據(jù)幾何原理得出任一點(diǎn)組成。這種方法較為直觀，也較簡單。

　　3、TLC的通用顯色方法

　　理想的顯色希望靈敏度高、斑點(diǎn)顏色穩(wěn)定、斑點(diǎn)與背景間的對比度好、斑點(diǎn)的大小及顏色的深度與物質(zhì)的量成正比。在樣品組成并不*已知的情況下，通用顯色方法顯得成尤為重要。通用顯色法主要有：

　　（1）、紫外照射法：方便，不破壞樣品；

　?。?）、碘蒸氣法：通用性強(qiáng)，與紫外法結(jié)合靈敏度高于該兩法單獨(dú)使用；

　?。?）、熒光試劑：制造熒光背景，使原來紫外下無熒光物質(zhì)被鑒別，有熒光物質(zhì)更明顯；

　　（4）、硫酸溶液：對絕大多數(shù)有機(jī)物有效，但有破壞性。

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