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師姐收藏的細(xì)胞培養(yǎng)小技巧
1. 不管是買(mǎi)的細(xì)胞，還是別人惠贈(zèng)的細(xì)胞，剛拿到手趕緊的做兩件事：檢測(cè)是否有支原體污染；迅速擴(kuò)增凍存，凍存細(xì)胞復(fù)蘇后第二天最好更換一次培養(yǎng)基。
2. 發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有污染迅速處理掉，特別是當(dāng)你養(yǎng)了很多種細(xì)胞時(shí)。細(xì)菌污染、真菌污染很容易發(fā)現(xiàn)，支原體污染的話，細(xì)胞會(huì)長(zhǎng)的慢，可以買(mǎi)個(gè)支原體檢測(cè)的試劑盒定期檢測(cè)一下。
3. 不同細(xì)胞生長(zhǎng)周期不同。有的生長(zhǎng)很快，比如說(shuō) MDA-MB-231，傳代的時(shí)候取離心懸液的十分之一就已經(jīng)足夠了。有的又是特別慢，比如 BT474，傳代是一分二，復(fù)蘇起始的時(shí)候兩周多才能長(zhǎng)滿。這就需要要在培養(yǎng)細(xì)胞的過(guò)程中多多摸索。
4. 對(duì)于嬌弱的細(xì)胞，就得細(xì)心呵護(hù)。胰酶消化不能過(guò)久，吹得時(shí)候要輕柔，離心時(shí)候也要注意轉(zhuǎn)速和時(shí)間。每天都要去看一下細(xì)胞，肉眼觀察培養(yǎng)基狀況、顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀況。記住，是每天。
操作方面
1. 最好不要和別人共用試劑耗材，自己準(zhǔn)備一套。自己的東西自己包自己烘干。槍頭什么的只要有可能污染就換。
2. 嚴(yán)格無(wú)菌操作。操作臺(tái)一定要擺個(gè)酒精燈，所有操作緊密?chē)@在酒精燈周?chē)M(jìn)行。離開(kāi)過(guò)操作臺(tái)的東西再進(jìn)操作臺(tái)之前一定要用酒精消毒一遍，稍微烤一下，別直接放到火上，離一段距離。包括一切實(shí)驗(yàn)耗材、儀器、以及你帶著手套的手。
3. 水浴鍋很臟，生化培養(yǎng)箱要是得手動(dòng)加濕的話盤(pán)里的水也會(huì)很臟，記得要勤換。身體的各個(gè)部分盡量的少接觸不需要接觸的地方的地方。比如實(shí)驗(yàn)臺(tái)，又比如培養(yǎng)箱內(nèi)部。培養(yǎng)箱隔一段時(shí)間用酒精棉擦洗一次。
4. 細(xì)胞房日常的值日清潔是必須的，此外還要定期熏蒸。晚上離開(kāi)的時(shí)候最好給細(xì)胞房照紫外，超凈臺(tái)是用完就開(kāi)。最好是同一時(shí)間就你一個(gè)人在細(xì)胞房養(yǎng)細(xì)胞。
5. 動(dòng)作要既輕柔又有力。動(dòng)作太重會(huì)有一堆一堆的氣泡，動(dòng)作太輕就吹不下來(lái)。剛開(kāi)始的時(shí)候吹細(xì)胞太痛苦了，稍微一下就起泡。后來(lái)就是吹的時(shí)候槍里的培養(yǎng)基不要一次全都?jí)撼鰜?lái)，留一點(diǎn)，槍的最頭部盡量深的在液面以下。