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馬蹄金下胚軸體培養(yǎng)與植物再生都要注意哪些？
150L光照培養(yǎng)箱具有超溫和傳感器異常保護功能，保障儀器和樣品安全；選配全光譜的植物生長燈，有利于植物的生長，提高抗病性。具有掉電記憶、掉電時間自動補償功能；恒溫控制系統(tǒng)，反應快，控溫精度高。
材料與方法
試驗材料
無菌苗下胚軸的獲取適量的馬蹄金種子,用自來水洗凈表面的包衣劑，至露出褐色表皮，再用洗潔精清洗一次后于流水中沖洗10 min,而后轉入超凈工作臺用體積分數(shù)70%的酒精消毒30s,再以1 g/L的HgCl,浸泡12 min,最后用無菌水沖洗3次，接種于MS培養(yǎng)基12)中,置于不同的光照條件下萌芽和生長。光照系在上海喆圖牌150L光照培養(yǎng)箱中進行,每天光照16 ho培養(yǎng)溫度為(25士1) ℃。
愈傷組織的誘導
種子萌芽5 d后，截取下胚軸靠近子葉端0.5cm長的小段，接種于添加不同植物生長調節(jié)劑的MS培養(yǎng)基上,在暗處培養(yǎng)，溫度為(25+1)℃。篩選植物生長調節(jié)劑組合效果較好的一種，再選用不同的基本培養(yǎng)基作試驗，截取同樣的下胚軸小段在相同條件下進行培養(yǎng)。
愈傷組織的分化
將愈傷組織轉入添加有不同植物生長調節(jié)劑組合的B5培養(yǎng)基L13]上培養(yǎng)誘導分化，同樣在上海喆圖牌150L光照培養(yǎng)箱中進行光照,每天光照16 h,培養(yǎng)溫度為(25士1) ℃。2結果與分析
光照對 下胚軸生長的影響
從實驗可以看出，在全部5 d光照條件下下胚軸生長極為緩慢，而且極短,顏色變綠;在全部黑暗條件下下胚軸生長快速而鮮，較長， 呈白色;先經3 d黑暗培養(yǎng),然后在2 d光照下培養(yǎng)的下胚軸生長緩慢而且逐漸變綠，長度適中。故為了較短時間內能獲得大量下胚軸，宜選擇在暗處培養(yǎng)基上生長緩慢，而在15培養(yǎng)基上生長最快，故B5培養(yǎng)基是一種較好的用于獲得馬蹄金下胚軸愈傷組織的基 本培養(yǎng)基。
討論
同一種基本培養(yǎng)基附加成分對愈傷組織形成的影響
愈傷組織的誘導、增殖及形態(tài)建成主要受外植體本身、培養(yǎng)基和培養(yǎng)環(huán)境三大因素的調控。植物生長調節(jié)物質對愈傷組織的誘導及分化具有十分復雜而重要的影響，在植物離體培養(yǎng)過程中，外植體的內源激素水平不斷變化,生長素類物質存在極性運輸現(xiàn)象，由此導致了其體內分布的特異性改變,這一變化與器官發(fā)生和愈傷組織的形成密切相關。培養(yǎng)基中加入生長調節(jié)物質可以改變和影響外植體的內源激素水平，同時生長素和細胞分裂素之間也可能相互影響。馬蹄金下胚軸在附加不同植物生長調節(jié)劑的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，都可誘導出愈傷組織，出愈率也較高(≥50%)，但植物生長調節(jié)劑對愈傷組織生長影響很大。一般在植物生長調節(jié)劑濃度較低時，愈傷組織生長狀況較好，這可能是因為馬蹄金內源細胞分裂素濃度較高,高濃度的外源生長調節(jié)劑反而抑制了愈傷組織的生長,從而進一步證實了受傷的植物細胞所釋放的物質對誘導細胞分裂具有重要作用。
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