該polyplus轉(zhuǎn)染試劑 jetPRIME®產(chǎn)品說(shuō)明書以DNA轉(zhuǎn)染為例來(lái)進(jìn)行說(shuō)明：
第0天：細(xì)胞接種
→根據(jù)下表在V mL細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基中接種細(xì)胞（每個(gè)孔、盤子或燒瓶的數(shù)量）
培養(yǎng)皿 | 細(xì)胞數(shù)量 | V=轉(zhuǎn)染過(guò)程中培養(yǎng)基的體積 |
96孔板 | 7500 - 10 000 | 0.1 mL |
24孔板 | 50 000 - 80 000 | 0.5 mL |
12孔板 | 80 000 - 150 000 | 1 mL |
6孔板/35mm | 150 000 - 250 000 | 2 mL |
100 mm/燒瓶 75 cm2 | 1 x 106 - 2 x 106 | 10 mL |
*備注：對(duì)于特定的細(xì)胞類型或懸浮細(xì)胞，請(qǐng)參考完整的方案。
第1天：轉(zhuǎn)染
→在血清存在的情況下進(jìn)行轉(zhuǎn)染
→僅使用jetPRIME®緩沖液
→以60-80%融合率轉(zhuǎn)染細(xì)胞
培養(yǎng)皿 | W=jetPRIME®緩沖液的體積 | X=添加的DNA量 | Y=jetPRIME®試劑的體積 |
96孔板 | 10 µL | 0.1 µg | 0.2 µL |
24孔板 | 50 µL | 0.5 µg | 1 µL |
12孔板 | 75 µL | 0.8 µg | 1.6 µL |
6孔板/35mm | 200 µL | 2 µg | 4 µL |
100 mm/燒瓶 75 cm2 | 500 µL | 10 µg | 20 µL |
第2-3天：測(cè)量基因表達(dá)
√ Protocol優(yōu)化：
測(cè)試不同的DNA量：X、0.5X和1.5X；
測(cè)試不同的DNA/jetPRIME®比例，1:2至1:3；
有關(guān)細(xì)胞特異性Protocol，請(qǐng)聯(lián)系益元利康客服獲取相關(guān)信息。
培養(yǎng)皿 | W=jetPRIME®緩沖液的體積 | X=添加的DNA量 | Y=jetPRIME®試劑的體積 |
96孔板 | 10 µL | 0.05-0.20 µg | 0.10-0.60 µL |
24孔板 | 50 µL | 0.25-0.75 µg | 0.50-2.25 µL |
12孔板 | 75 µL | 0.4-1.2 µg | 0.8-3.6 µL |
6孔板/35mm | 200 µL | 1-3 µg | 2-9 µL |
100 mm/燒瓶 75 cm2 | 500 µL | 5-15 µg | 10-45 µL |
備注：對(duì)于HEK-293和HeLa細(xì)胞，可以將DNA量減少到0.5X，并使用1:2 DNA/jetPRIME®比例。
√ 提高敏感細(xì)胞細(xì)胞活力的提示：
轉(zhuǎn)染后4小時(shí)更換培養(yǎng)基；
將DNA量減少到0.5倍，同時(shí)保持之前使用的DNA/jetPRIME®比例；
在較早的時(shí)間點(diǎn)（例如轉(zhuǎn)染后24小時(shí)而不是48小時(shí)）分析轉(zhuǎn)染；
檢查靶基因是否影響細(xì)胞活力。
√ 良好的DNA轉(zhuǎn)染實(shí)例：
適當(dāng)儲(chǔ)存jetPRIME®（5±3°C）；
確保細(xì)胞在轉(zhuǎn)染前已傳代兩次以上且少于20次；
丟棄過(guò)度分化的細(xì)胞；
定期檢查支原體污染情況；
使用報(bào)告基因來(lái)建立和優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件；
血清質(zhì)量可能嚴(yán)重影響轉(zhuǎn)染效率，購(gòu)買新一批血清時(shí)或胰蛋白酶檢查細(xì)胞活力以及轉(zhuǎn)染效率。
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區(qū)公司產(chǎn)品線涉及細(xì)胞與基因治療、免疫學(xué)、分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)等多個(gè)方向，專注于生命科學(xué)試劑、耗材、細(xì)胞、儀器
等產(chǎn)品銷售，經(jīng)營(yíng)的品牌主要有：ThermoFisher、Sigma、Qiagen、EZBioscience、ZYMO Research、MedKoo、Abcam、Polyplus等等。我們提供質(zhì)優(yōu)價(jià)美的產(chǎn)品、及時(shí)到位的服務(wù)，努力成長(zhǎng)為生命科學(xué)和生物技術(shù)企業(yè)的優(yōu)質(zhì)供應(yīng)商。
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