第0天：細(xì)胞接種
→根據(jù)下表在V mL細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)種子細(xì)胞
每個(gè)孔、盤子或燒瓶的數(shù)量
*對(duì)于特定的細(xì)胞類型或懸浮細(xì)胞，請(qǐng)參考完整的方案。
第1天：轉(zhuǎn)染
→在血清存在的情況下進(jìn)行轉(zhuǎn)染
→僅使用jetPRIME®緩沖液
→以60-80%的融合率轉(zhuǎn)染細(xì)胞
每個(gè)孔、盤子或燒瓶的數(shù)量
第2-3天：測(cè)量基因表達(dá)
優(yōu)化方向：
(1)測(cè)試不同的DNA量：X、0.5X和1.5X。
(2)測(cè)試不同的DNA/jetPRIME®比例，1:2至1:3。
每個(gè)孔、盤子或燒瓶的數(shù)量
對(duì)于HEK-293和HeLa細(xì)胞，可以將DNA量減少到0.5倍，并使用1:2 DNA/jetPRIME®比例。
提高敏感細(xì)胞細(xì)胞活力的技巧：
（1）轉(zhuǎn)染后4小時(shí)更換培養(yǎng)基。
（2）將DNA量減少到0.5倍，同時(shí)保持之前使用的DNA/jetPRIME®比例。
（3）在較早的時(shí)間點(diǎn)（例如轉(zhuǎn)染后24小時(shí)而不是48小時(shí)）分析轉(zhuǎn)染。
（4）檢查靶基因是否影響細(xì)胞活力。
良好的DNA轉(zhuǎn)染實(shí)踐：
（1）適當(dāng)儲(chǔ)存jetPRIME®（5±3°C）。
（2）確保細(xì)胞在轉(zhuǎn)染前傳代兩次以上且少于20次。
（3）丟棄過(guò)度流暢的細(xì)胞。
（4）定期檢查支原體污染情況。
（5）使用報(bào)告基因來(lái)建立和優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件。
（6）血清質(zhì)量可能會(huì)嚴(yán)重影響轉(zhuǎn)染效率。購(gòu)買新一批血清時(shí)或胰蛋白酶檢查細(xì)胞活力以及轉(zhuǎn)染效率。
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