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安捷倫科技(中國(guó))有限公司

推“柱”之薦|配方顆粒色譜柱推薦之王不留行和炒王不留行

時(shí)間:2022-9-9 閱讀:814
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在前幾期,我們重點(diǎn)為大家介紹并推薦了適用于中藥配方顆粒檢測(cè)的各類安捷倫色譜柱,以便大家在日后的檢測(cè)工作中匹配使用。本期繼續(xù)帶來(lái)適用于不留行和炒王不留行配方顆粒檢測(cè)的色譜柱推薦,跟上我們,精彩繼續(xù)!


Agilent Polaris 系列色譜柱通過(guò)極性改性,增強(qiáng)了鍵合相與水的兼容性,同時(shí)避免次級(jí)作用的影響。通過(guò)極性封端(Polaris C18-A,C8-A,C18-ether,C8-ether)或者極性包埋(Polaris Amide-C18),Polaris 系列色譜柱可與 100% 水相兼容。由于極性修飾的作用,Polaris 系列色譜柱具有特殊的選擇性。


在國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中,王不留行和炒王不留行配方顆粒的檢測(cè)項(xiàng)目中,對(duì)特征譜圖和含量測(cè)定都采用 HPLC 方法。特征譜圖指定使用 ZORBAX Eclipse XDB C18 4.6x250mm, 5μm 色譜柱,含量測(cè)定也使用 HPLC 色譜柱。其中含量測(cè)定中系統(tǒng)適用性要求王不留行黃酮苷峰的理論板數(shù)按應(yīng)不低于 3000。本文采用 ZORBAX Eclipse XDB C18 色譜柱對(duì)特特圖譜進(jìn)行了重現(xiàn),選用 Polaris C18-A 色譜柱用于含量測(cè)定。并采用 ZORBAX 的超高效色譜柱進(jìn)行了 UHPLC 方法轉(zhuǎn)換,提高分析效率。


1

特征譜圖

1.1 王不留行實(shí)驗(yàn)結(jié)果

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圖 1. 王不留行配方顆粒標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照譜圖與方法重現(xiàn)供試品特征譜圖(包括標(biāo)準(zhǔn)方法和 UHPLC 方法)的比較 (峰 3(S):王不留行黃酮苷)


色譜條件:

標(biāo)準(zhǔn)方法:

?

流動(dòng)相:A:乙腈;B:H2O(0.1%磷酸)

?

梯度:0-35 min,95 %-80%B;35-60 min,80%B-40%B;后運(yùn)行,10min

?

流速:1ml/min

?

柱溫:30 °C

?

檢測(cè)波長(zhǎng):270 nm(4nm), Ref: off; 采樣頻率:2.5Hz

?

進(jìn)樣量:10 μL


UHPLC 方法:

?

梯度:0-5 min,95 %-80%B;5-9 min,80%B-40%B;后運(yùn)行,3min

?

流速:0.6ml/min

?

檢測(cè)波長(zhǎng):270 nm(4nm), Ref: off; 采樣頻率:20Hz

?

進(jìn)樣量:1 μL

?

其余同上。




系統(tǒng)適用性結(jié)果見(jiàn)下表:

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1.2 炒王不留行實(shí)驗(yàn)結(jié)果

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色譜條件:

同王不留行。




系統(tǒng)適用性結(jié)果見(jiàn)下表:

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結(jié)果

1)使用 ZORBAX Eclipse XDB C18 柱,重現(xiàn)王不留行和炒王不留行標(biāo)準(zhǔn)方法,所有特征峰均能準(zhǔn)確定位,且相對(duì)保留時(shí)間(RRT)*符合標(biāo)準(zhǔn)要求。


2)UHPLC 方法中,王不留行環(huán)肽 B 的峰稍微提前,但通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照定位,綜合研判,可符合標(biāo)準(zhǔn)要求。


3) UHPLC 方法可使分析時(shí)間縮短至原來(lái)的 15%。





2

含量測(cè)定

2.1 王不留行實(shí)驗(yàn)結(jié)果

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圖 2.供試品含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)方法和 UHPLC 方法譜圖對(duì)照


色譜條件:

標(biāo)準(zhǔn)方法:

?

流動(dòng)相:A:乙腈;B:H2O(0.3%磷酸)

?

梯度:0-10 min,65 %-65%B;10-20 min,65%B-60%B;20-35 min,60%B-60%B;后運(yùn)行,10min

?

流速:1ml/min

?

柱溫:35 °C

?

檢測(cè)波長(zhǎng):280 nm(4nm), Ref: off; 采樣頻率:2.5Hz

?

進(jìn)樣量:10 μL


UHPLC 方法:

?

梯度:0-2.1 min,65 %-65%B;2.1-4.2 min,65%B-60%B,4.2-7.4 min,60%B-60%B;后運(yùn)行,10min

?

流速:0.4ml/min

?

檢測(cè)波長(zhǎng):280 nm(4nm), Ref: off; 采樣頻率:20Hz

?

進(jìn)樣量:1 μL




系統(tǒng)適用性結(jié)果見(jiàn)下表:

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結(jié)果

1)選擇 Polaris C18-A 色譜柱,可以滿足含量測(cè)定系統(tǒng)適用性中理論板數(shù)要求(N>3000)。


2)由于存在溶劑效應(yīng),實(shí)驗(yàn)中在自動(dòng)進(jìn)樣器和柱溫箱之間使用一段溶劑效應(yīng)消除管線,可以進(jìn)一步提高 HPLC 方法中的理論板數(shù)(接近于 4000),有利于提高分析方法的耐用性。


3) UHPLC 方法使用 Zorbax RRHD SB-Aq 柱,可以滿足系統(tǒng)適用性要求,并提高分析效率。




實(shí)驗(yàn)結(jié)論 .

本實(shí)驗(yàn)選用 ZORBAX Eclipse XDB C18 色譜柱對(duì)王不留行和炒王不留行配方顆粒特征譜圖進(jìn)行重現(xiàn),均符合標(biāo)準(zhǔn)要求。特征圖譜方法轉(zhuǎn)換成 UHPLC 方法后,有利于分析效率提升。含量測(cè)定中,使用 Polaris C18-A 有利于滿足系統(tǒng)適用性對(duì)理論板數(shù)的要求,必要時(shí)增加溶劑效應(yīng)消除管線,進(jìn)一步提高理論塔板數(shù)。







儀器系統(tǒng)及色譜柱推薦

1260 Infinity II 四元 HPLC 系統(tǒng):四元泵 (G7111B),自動(dòng)進(jìn)樣器 (G7129A),柱溫箱 (G7116A),VWD (G7114A)


1290 Infinity II 四元 UHPLC 系統(tǒng):全能泵(G7104A),自動(dòng)進(jìn)樣器(G7129B),柱溫箱(G7116B),DAD(G7117A)

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其它詳細(xì)操作可以參考 Agilent 配方顆粒圖譜集,或聯(lián)系 Agilent。





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