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人軟骨細(xì)胞特點(diǎn)和傳代步驟

時間:2022-6-22 閱讀:949
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  人軟骨細(xì)胞特點(diǎn)和傳代步驟
  人軟骨細(xì)胞,外文名chondrocyte,是軟骨細(xì)胞因在軟骨組織中的存在部位不同,其形態(tài)亦異。
  人軟骨細(xì)胞特點(diǎn):
  人軟骨細(xì)胞(Chondrocyte); 幼稚的軟骨細(xì)胞位于軟骨組織的表層,單個分布,體積較小,呈橢圓形,長軸與軟骨表面平行,越向深層的軟骨細(xì)胞體積之間增大呈圓形,細(xì)胞核圓形或卵圓形,染色淺,細(xì)胞質(zhì)弱嗜堿性,常見數(shù)量不一的脂滴。成熟的軟骨細(xì)胞多2~8個成群分布于軟骨陷窩內(nèi),這些軟骨細(xì)胞由同一個母細(xì)胞分裂增殖而成,稱為同源細(xì)胞群。電鏡下,軟骨細(xì)胞有突起和皺褶,細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有大量的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和發(fā)達(dá)的高爾基復(fù)合體及少量的線粒體。在組織切片中,軟骨細(xì)胞收縮為不規(guī)則形,在軟骨囊和細(xì)胞之間出現(xiàn)較大的腔隙。
  軟骨細(xì)胞埋藏在軟骨間質(zhì)內(nèi),它所存在的部位為一小腔,稱為軟骨陷窩(cartilage lacuna)。在HE染色標(biāo)本上,陷窩周圍的軟骨基質(zhì)呈強(qiáng)嗜堿性,染色很深,稱軟骨囊(cartilage lacuna)。同源細(xì)胞群中的每個軟骨細(xì)胞分別圍以軟骨囊。
  人軟骨細(xì)胞傳代步驟:
  如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

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