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PriCells: 臺(tái)盼藍(lán)染色法

時(shí)間:2021-10-15 閱讀:1823
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PriCells: 臺(tái)盼藍(lán)染色法
材料:
1. 顯微鏡、玻片、蓋玻片、滴管;
2. 試劑:0.4%臺(tái)盼藍(lán)染液;
3. 臺(tái)盼藍(lán)(Trypan blue):0.4g;
4. 生理鹽水:100ml;
操作步驟:
1. 用Hanks液配制0.1%臺(tái)盼藍(lán)溶液;
2. 用0.5%胰蛋白酶:0.2%EDTA=1:1混合液來(lái)消化培養(yǎng)的貼壁細(xì)胞;
3. 再加入適量Hanks液制成細(xì)胞懸液;
4. 將待染色細(xì)胞稀釋至所需濃度(方法及濃度范圍與細(xì)胞計(jì)數(shù)相同);
5. 每0.1ml細(xì)胞懸液約加新鮮配制的染液一小滴,室溫下染3—5min;
6. 染色過(guò)的細(xì)胞材料,取一滴細(xì)胞懸液置玻片上,加蓋玻片后放高倍鏡下觀察;
7. 死亡的細(xì)胞著淺藍(lán)色并膨大,無(wú)光澤。活細(xì)胞不著色并保持正常形態(tài),有光澤;
8. 計(jì)數(shù)1000個(gè)細(xì)胞中的活細(xì)胞和死細(xì)胞數(shù)目;
9. 統(tǒng)計(jì)未染色細(xì)胞??砂垂接?jì)算出細(xì)胞活率。
細(xì)胞活率(%)=未染色的細(xì)胞數(shù)/觀察的細(xì)胞總數(shù)×100
注意事項(xiàng):
1. 染色時(shí)間不能太長(zhǎng),否則活細(xì)胞也會(huì)逐漸積累染料而染成顏色,使監(jiān)測(cè)結(jié)
果偏低;
2. 另可結(jié)合細(xì)胞計(jì)數(shù)方法,同時(shí)進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)和活力檢測(cè);



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