5
當前位置：武漢原生原代生物醫(yī)藥科技有限公司>>技術文章>>PriCells: 正常晶狀體上皮細胞原代培養(yǎng)
PriCells: 正常晶狀體上皮細胞原代培養(yǎng)
PriCells: 正常晶狀體上皮細胞原代培養(yǎng)
實驗材料：
1. 材料來源：人眼、兔眼或者豬眼等；
2. 清洗液：不含Ca2+和Mg2+的1×PBS，添加100IU/ml青霉素、100μg/ml鏈霉素，pH7.2；
3. 器械：無齒顯微小鑷子2把、培養(yǎng)板和培養(yǎng)皿若干；
4. 培養(yǎng)液：為含15%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液；
實驗方法：
1. 取材
1）摘取動物或人的供體眼球，作常規(guī)消毒處理；
2）用刀片沿角鞏膜緣環(huán)形剪開眼球，除去角膜和虹膜，并用角膜剪刀剪斷晶狀體懸韌帶，取出晶狀體，置于培養(yǎng)皿中；
3）用PBS液洗去黏附在晶狀體表面的虹膜色素及玻璃體。棄去洗液；、
4）將晶狀體的凸面向下，用4號針頭于晶狀體赤道部稍靠后的部位環(huán)刺一圈，然后用兩把無齒顯微鑷子輕輕分離出晶狀體前囊膜；
2. 原代培養(yǎng)；
1）取下晶狀體前囊膜后，一般不經(jīng)洗滌。將其剪成余額1.5mm×1.5mm的植塊；
2）用無齒顯微鑷子挑起植塊，平貼于培養(yǎng)板中；
3）置于37℃恒溫箱中約5min，待組織塊稍干后便可加入培養(yǎng)液；
4）按常規(guī)方法培養(yǎng)。每周換培養(yǎng)液2次，每次更換2/3的培養(yǎng)液量；
3. 傳代培養(yǎng)：在培養(yǎng)細胞基本融合形成單層時即需傳代。否則細胞會因生存空間不足或由于細胞密度過大而致營養(yǎng)不足。按常規(guī)方法進行傳代培養(yǎng)；
PriCells提供：
1. 各種原代細胞特制基礎培養(yǎng)基；
2. 各種原代細胞培養(yǎng)特制添加劑；
3. 原代細胞分離試劑盒；
4. 原代細胞鑒定試劑盒；
5. 原代細胞總蛋白質(zhì)抽提物；
6. 原代細胞總RNA；
7. 原代細胞總DNA；