PriCells: 動(dòng)物腸黏膜上皮細(xì)胞的培養(yǎng)

實(shí)驗(yàn)材料：

1. 動(dòng)物胎體小腸黏膜或死亡胎兒的小腸黏膜

2. 1%Ⅳ膠原蛋白鋪培養(yǎng)瓶，放超凈工作臺(tái)上干燥

3. 不含Ca2+和Mg2+的1×PBS，添加200000IU/L青霉素、200mg/L鏈霉素和200000U/L慶大霉素，pH7.4

4. 300000U/LⅪ型膠原酶和0.1g/LⅠ型中性蛋白酶混合消化液，DMEM配置

5. 解剖剪、解剖鑷、眼科剪，眼科鑷

6. 離心管（15ml、50ml）

實(shí)驗(yàn)方法：

1. 取妊娠17-19d胎鼠，放入70%乙醇中消毒1min。經(jīng)腹正中切口取出小腸，放入預(yù)冷的PBS中。

2. 用PBS沖洗后，剪除腸系膜?？v行剪開腸壁，用PBS沖洗3次，洗去粘液。

3. 將腸壁剪成1mm3左右的小塊的組織塊，放入20ml消化液中，37℃水浴中振蕩消化30min。

4. 用吸管反復(fù)吹打組織塊3-5min，然后以1000r/min，離心5min。吸去消化液后，加入PBS，反復(fù)吹打，懸浮沉淀的腸絨毛組織。在相差顯微鏡下觀察可見單個(gè)黏膜上皮細(xì)胞或隱窩細(xì)胞團(tuán)。

5. 將消化下來的細(xì)胞或細(xì)胞團(tuán)加入分離管中，再加入分散液，吹打均勻，靜置1min。然后，收集含細(xì)胞或細(xì)胞團(tuán)的上清液。重復(fù)3-4次。

6. 將收集的上清液離心（1500r/min，5min）。用分散液將單個(gè)細(xì)胞和腸隱窩細(xì)胞團(tuán)混懸，離心（1500r/min，5min），重復(fù)3-4次。

7. 用培養(yǎng)液混懸沉淀細(xì)胞，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中，放入37℃，含5%CO2的孵箱中培養(yǎng)。

8. 48h后換培養(yǎng)液，以后每隔2-3d換液1次。

PriCells-原代上皮細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基

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