以下是關(guān)于人促紅細(xì)胞生成素(EPO)ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)使用說明：

　　BS-10009 人促紅細(xì)胞生成素(EPO)ELISA試劑盒

　　一、實(shí)驗(yàn)原理

　　雙抗體夾心法?：采用包被抗人EPO抗體的微孔板捕獲樣本中的EPO，再通過酶標(biāo)抗體形成復(fù)合物，經(jīng)顯色反應(yīng)測定濃度。

　　顯色機(jī)制?：底物TMB在過氧化物酶催化下顯藍(lán)色，終止后轉(zhuǎn)為黃色，OD值與EPO濃度成正比。

　　二、試劑盒組成

　　標(biāo)準(zhǔn)品?：需用蒸餾水稀釋至400mIU/mL，梯度稀釋后使用。

　　酶標(biāo)試劑?：HRP標(biāo)記的檢測抗體。

　　洗滌液/終止液?：濃縮洗滌液需20倍稀釋，終止液為硫酸溶液。

　　三、樣本處理

　　血清/血漿?：室溫靜置后離心取上清，避免反復(fù)凍融。

　　組織勻漿?：PBS沖洗后勻漿，離心取上清。

　　細(xì)胞培養(yǎng)上清?：直接離心后檢測。

　　四、操作步驟

　　加樣?：空白孔加稀釋液，標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔各加100μL，37℃孵育2小時。

　　洗滌?：棄液體后加檢測抗體A/B工作液，分別孵育1小時，洗滌3-5次。

　　顯色?：加TMB底物避光反應(yīng)15-30分鐘，終止后450nm測OD值。

　　五、注意事項(xiàng)

　　預(yù)實(shí)驗(yàn)?：建議使用前做預(yù)實(shí)驗(yàn)以優(yōu)化條件。

　　時間控制?：加樣間隔不超過10分鐘，避免孵育時間差異。

　　保存?：試劑2-8℃保存，樣本-20℃以下凍存。

　　六、結(jié)果計(jì)算

　　以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)、OD值為縱坐標(biāo)繪制曲線，樣本濃度通過回歸方程計(jì)算。

　　如需更詳細(xì)的步驟圖示或特殊樣本處理方法，可參考試劑盒附帶的完整說明書。

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