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氣相色譜聯(lián)用儀為尿類固醇分析提供優(yōu)勢
氣相色譜聯(lián)用儀一直是類固醇譜臨床評估的關鍵。評估了串聯(lián)質譜法提供的測定性能改進。在所測試的糖皮質激素和雄激素分析物的范圍內(nèi)，三重四極桿系統(tǒng)的檢測和定量限比單四極桿系統(tǒng)低約 20 倍，但更顯著的改進是信噪比得到顯著改善，線性范圍更寬。這些好處允許更可靠和伴隨測量具有顯著不同豐度和更小體積尿液的類固醇。
腎上腺和性腺類固醇的尿代謝物分析已經(jīng)常規(guī)進行了大約 30 年，定義了一種在全球范圍內(nèi)用于研究和臨床診斷的方法，也被擴展到毒理學領域。在臨床上，這種分析已廣泛用于先天性代謝缺陷的診斷，*近還用于腎上腺腫瘤的鑒別診斷. *初，通過氣相色譜 (GC) 和火焰離子化檢測器 (FID) 等檢測器測定類固醇的甲氧基胺-三甲基甲硅烷基衍生物的概況，但*近通過單四極桿質譜儀 (MS) 鑒定了類固醇。MS 的使用增強了 FID 的特異性，但挑戰(zhàn)依然存在。類固醇及其代謝物的數(shù)量在分析物和疾病狀態(tài)之間差異很大，這意味著校準范圍可能會有很大差異。尤其是一些類固醇的含量較低（例如皮質醇），并且接近可接受的定量限 (LOQ)，即使在提取相對大量 (~20 mL) 的尿液之后也是如此。
使用串聯(lián)質譜 (MS/MS) 可以改善信噪比，從而降低 LOQ。*近，液相色譜 (LC)-MS/MS 已成為定量分析的優(yōu)選方法。由于通常不需要衍生化，因此可以獲得更高的通量。盡管電離效率較差，但一些中性類固醇可以通過電噴霧 (ESI) 和大氣壓化學 (APCI) 電離成功量化，盡管它們的信號容易受到基質離子抑制的影響。盡管如此，更豐富的循環(huán)孕烯和雄烯類固醇，如皮質醇和睪酮，現(xiàn)在通常通過這種方式進行量化。然而，它們的代謝產(chǎn)物，其中一些保留了生物活性, 無法使用 LC-MS/MS 輕松檢測或區(qū)分。A 環(huán)中酮烯醇功能的代謝形成 5α 和 5β 還原的二氫產(chǎn)物，隨后 3-酮被 3α 和 β-羥基類固醇脫氫酶還原并產(chǎn)生離子化不佳的代謝物。此外，LC 對多組立體異構體的分離是有問題的。
因此，GC-MS/MS 對類固醇激素具有固有的優(yōu)勢，因為它們提供了一系列結構相似的親脂性分析物。為 GC 分析形成的異構衍生物可以更容易地分辨，促進立體化學區(qū)分。此外，與前體激素相比，來自代謝物衍生物的信號強度沒有受到影響。我們通過單四極桿分析調整了基于 GC 的尿類固醇分析方法，以利用串聯(lián)質譜的能力，并在此報告經(jīng)過驗證的測定。