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如何正確地使用色譜柱

閱讀:1919      發(fā)布時(shí)間:2023-5-8
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  1、吸附柱色譜
  吸附色譜的原理:在一定條件下,硅膠與被分離物質(zhì)之間產(chǎn)生作用,這種作用主要是物理和化學(xué)作用兩種.物理作用來(lái)自于硅膠表表面與溶質(zhì)分子之間的范德華力.化學(xué)作用主要是硅膠表面的硅羥基與待分離物質(zhì)之間的氫鍵作用。
  色譜管為內(nèi)徑均勻、下端縮口的硬質(zhì)玻璃管,下端用棉花或玻璃纖維塞住,管內(nèi)裝入吸附劑。吸附劑的顆粒應(yīng)盡可能保持大小均勻,以保證良好的分離效果。除另有規(guī)定外,通常多采用直徑為0.07~0.15mm的顆粒。色譜柱的大小,吸附劑的品種和用量,以及洗脫時(shí)的流速,均按各品種項(xiàng)下的規(guī)定。
  2、分配柱色譜
  方法和吸附柱色譜基本一致。裝柱前,先將載體和固定液混合,然后分次移入色譜柱中并用帶有平面的玻棒壓緊;供試品可溶于固定液,混以少量載體,加在預(yù)制好的色譜柱上端。洗脫劑需先加固定液混合使之飽和,以避免洗脫過(guò)程中兩相分配的改變。
  色譜柱的大小規(guī)格由待分離樣品的量和吸附難易程度來(lái)決定。一般柱管的直徑為0.5~l0 cm,長(zhǎng)度為直徑的10~40倍。填充吸附劑的量約為樣品重量的20~50倍,柱體高度應(yīng)占柱管高度的3/4,柱子過(guò)于細(xì)長(zhǎng)或過(guò)于粗短都不好。
  裝柱前,柱子應(yīng)干凈、干燥,并垂直固定在鐵架臺(tái)上,將少量洗脫劑注入柱內(nèi),取一小團(tuán)玻璃毛或脫脂棉用溶劑潤(rùn)濕后塞入管中,用一長(zhǎng)玻璃棒輕輕送到底部,適當(dāng)搗壓,趕出棉團(tuán)中的氣泡,但不能壓得太緊,以免阻礙溶劑暢流(如管子帶有篩板,則可省略該步操作)。再在上面加入一層約0.5 cm厚的潔凈細(xì)砂,從對(duì)稱方向輕輕叩擊柱管,使砂面平整。
  常用的裝柱方法有干裝法和濕裝法兩種。
  1、干裝法:在柱內(nèi)裝入2/3溶劑,在管口上放一漏斗,打開活塞,讓溶劑慢慢地滴入錐形瓶中,接著把干吸附劑經(jīng)漏斗以細(xì)流狀傾瀉到管柱內(nèi),同時(shí)用套在玻璃棒(或鉛筆等)上的橡皮塞輕輕敲擊管柱,使吸附劑均勻地向下沉降到底部。
  填充完畢后,用滴管吸取少量溶劑把粘附在管壁上的吸附劑顆粒沖入柱內(nèi),繼續(xù)敲擊管子直到柱體不再下沉為止。柱面上再加蓋一薄層潔凈細(xì)砂,把柱面上液層高度降至0.1~l cm,再把收集的溶劑反復(fù)循環(huán)通過(guò)柱體幾次,便可得到沉降得較緊密的柱體。
  2、濕裝法:基該方法與干裝法類似,所不同的是,裝柱前吸附劑需要預(yù)先用溶劑調(diào)成淤漿狀,在倒入淤漿時(shí),應(yīng)盡可能連續(xù)均勻地一次完成。如果柱子較大,應(yīng)事先將吸附劑泡在一定量的溶劑中,并充分?jǐn)嚢韬筮^(guò)夜(排除氣泡),然后再裝。
  無(wú)論是干裝法,還是濕裝法,裝好的色譜柱應(yīng)是充填均勻,松緊適宜一致,沒(méi)有氣泡和裂縫,否則會(huì)造成洗脫劑流動(dòng)不規(guī)則而形成“溝流”,引起色譜帶變形,影響分離效果。

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