葡聚糖凝膠G-25的操作步驟

時間：2019/7/17閱讀：2373

葡聚糖凝膠G-25說明：
葡聚糖凝膠G-25(Sephadex G-25)，吸水率是2.5mL/g干膠，葡聚糖凝膠是一種珠狀的凝膠，含有大量的羥基，很容易在水中和電解質(zhì)溶液中溶脹；G型的葡聚糖凝膠有各種不同的交聯(lián)度，因此它們的溶脹度和分級分離范圍也有所不同；葡聚糖凝膠的溶脹度基本上不因鹽和洗滌劑的存在而受影響。

葡聚糖凝膠G-25操作步驟：
1、毫升蒸餾水，攪拌均勻，在室溫溶脹6小時，或沸水浴溶脹2小時，一般采用后一種方法；再用傾瀉法除去凝膠上層水及細小顆粒，用蒸餾水反復洗滌幾次，再以緩沖溶液(pH7.0的Tris—醋酸溶液)洗滌2—3次，使pH和離子強度達到平衡，zui后抽去溶液及凝膠顆粒內(nèi)部氣泡，凝膠可保存在緩沖液內(nèi)。

2.裝柱：將層析柱洗凈，垂直固定在鐵支架上，選擇有薄膜端作為層析柱下口，將下口凝膠表面平齊時，關(guān)閉下端出口。

3、用少量洗脫液清洗層析柱加樣區(qū)，共洗滌三次，每次清洗液應*進入凝膠柱內(nèi)后，再進行下一次洗滌；zui后在凝膠表面上加入洗脫液，保持高度為3—4cm。

4、洗脫與收集：連接好凝膠柱層析系統(tǒng)，調(diào)節(jié)洗脫液流速為每分鐘1毫升，進行洗脫；仔細觀察樣品在層析柱內(nèi)的分離現(xiàn)象，收集洗脫液，每收集3毫升即換一支收集管(試管預先編號)，收集約20管左右，樣品即可*被洗脫下來；將各收集管中的洗脫液分別用721型分光光度計在波長540nm處測定其光密度。

5、凝膠回收處理方法：將樣品*洗脫下來后，繼續(xù)用三倍柱床體積的洗脫液沖洗凝膠后，將柱下口放在小燒杯中，慢慢打開，再將上口慢慢松開，使凝膠全部回收至小燒杯中，備用。

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