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色譜法中常用定量方法分享
眾suo周知，色譜法能解決那些物理常數(shù)相近，化學(xué)性質(zhì)類似的同系物、異構(gòu)體等復(fù)雜多組分混合物的分離分析問題，既能鑒定化合物又能做定量測定。色譜法是根據(jù)色譜峰的面積或高度進(jìn)行定量分析的。色譜定量計(jì)算方法很多，目前比較廣泛應(yīng)用的有歸一化法、內(nèi)標(biāo)法和外標(biāo)法三種。今天就由小編給大家簡單分享一下色譜法中常用的幾種定量方法。
歸一化法
由于組分的量與其峰面積成正比，如果樣品中所有組分都能產(chǎn)生信號，得到相應(yīng)的色譜峰，那么可以用如下歸一化公式計(jì)算各組分的含量。
式中：C表示含量
F表示校正因子
A表示峰面積
若樣品中各組分的校正因子相近，可將校正因子消去，直接用峰面積歸一化進(jìn)行計(jì)算。中國藥典用不加校正因子的面積歸一化法測定藥物中各雜質(zhì)及雜質(zhì)的總量限度。
優(yōu)點(diǎn)：
1.簡單、快速的定量過程；
2.進(jìn)樣量不要求嚴(yán)格。
缺點(diǎn)：
1.所有組分峰都要流出；
2.需測量所有的組分；
3.必須校正所有的峰。
內(nèi)標(biāo)法
選擇樣品中不含有的純物質(zhì)作為對照物質(zhì)加入待測樣品溶液中，以待測組分和對照物質(zhì)的響應(yīng)信號對比，測定待測組分含量的方法稱為內(nèi)標(biāo)法?！皟?nèi)標(biāo)"的由來是因?yàn)闃?biāo)準(zhǔn)（對照）物質(zhì)加入到樣品中，有別于外標(biāo)法。該對照物質(zhì)稱為內(nèi)標(biāo)物。
在一個分析周期內(nèi)不是所有組分都能流出色譜柱（如有難氣化組分），或檢測器不能對每個組分都產(chǎn)生信號，或只需測定混合物中某幾個組分的含量時，可采用內(nèi)標(biāo)法。
準(zhǔn)確稱量W克樣品，再準(zhǔn)確稱量Ws克內(nèi)標(biāo)物，加入至樣品中，混勻，進(jìn)樣。測量待測組分i的峰面積Ai及內(nèi)標(biāo)物的峰面積As，則i組分在W克樣品中所含的重量Wi，與內(nèi)標(biāo)物的重量Ws，有下述關(guān)系：
待測組分i在樣品中的百分含量C%為：
對內(nèi)標(biāo)物的要求：
1.內(nèi)標(biāo)物是原樣品中不含有的組分，否則會使峰重疊而無法準(zhǔn)確測量內(nèi)標(biāo)物的峰面積；
2.內(nèi)標(biāo)物的保留時間應(yīng)與待測組分相近，但彼此能*分離(R≥1.5)；
3.內(nèi)標(biāo)物必須是純度合乎要求的純物質(zhì)。
優(yōu)點(diǎn)：
1.在進(jìn)樣量不超限（色譜柱不超載）的范圍內(nèi)，定量結(jié)果與進(jìn)樣量的重復(fù)性無關(guān)。
2.只要被測組分及內(nèi)標(biāo)物出峰，且分離度合乎要求，就可定量，與其他組分是否出峰無關(guān)。
3.很適用于測定藥物中微量有效成分或雜質(zhì)的含量。由于雜質(zhì)（或微量組分）與主要成分含量相差懸殊，無法用歸一化法測定含量，用內(nèi)標(biāo)法則很方便。
缺點(diǎn)：加一個與雜質(zhì)量相當(dāng)?shù)膬?nèi)標(biāo)物。加大進(jìn)樣量突出雜質(zhì)峰，測定雜質(zhì)峰與內(nèi)標(biāo)峰面積之比，即可求出雜質(zhì)含量。但樣品配制比較麻煩和內(nèi)標(biāo)物不易找尋。
外標(biāo)法（校正曲線法 校正因子求算法）
外標(biāo)法是指按梯度添加一定量的標(biāo)準(zhǔn)品（對照品）于空白溶劑中制成對照樣品，與未知試樣平行地進(jìn)行樣品處理并檢測。不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)樣，以峰面積為值繪制成標(biāo)準(zhǔn)曲線，從而推算出未知試樣中被測組分濃度的定量方法外標(biāo)法在操作上可分為校正曲線法和校正因子求算法。
校正曲線法：取純物質(zhì)配成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，利用色譜儀作出峰面積和濃度的關(guān)系標(biāo)準(zhǔn)曲線。通過標(biāo)準(zhǔn)曲線直接查出待測組分濃度。
校正因子求算法：是將標(biāo)樣多次分析后得到響應(yīng)信號與其含量求出它的絕對校正因子，再根據(jù)公式求出待測樣品中的含量。
式中：C表示含量
F表示校正因子
A表示峰面積
優(yōu)點(diǎn)：操作和計(jì)算簡便，無需所有峰都能被檢測到。
缺點(diǎn)：進(jìn)樣量必須準(zhǔn)確，儀器要求具有良好的穩(wěn)定性。