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C18液相色譜柱的流動相配制及污染再生技術(shù)
C18液相色譜柱的系統(tǒng)由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進樣器進入流動相，被流動相載入色譜柱（固定相）內(nèi)，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中作相對運動時，經(jīng)過反復(fù)多次的吸附-解吸的分配過程，各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別，被分離成單個組分依次從柱內(nèi)流出，通過檢測器時，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來。
C18液相色譜柱的流動相配制：
a、流動相對樣品具有一定的溶解能力，并且保證樣品不會在色譜柱內(nèi)析出或長時間留在色譜柱內(nèi)；
b、流動相不與樣品發(fā)生反應(yīng)；
c、流動相粘度盡量小，使樣品得到高效分離的同時降低柱壓，延長色譜柱壽命；
d、流動相沸點不能太低，避免有氣泡產(chǎn)生，影響實驗進行；
e、流動相要保證現(xiàn)配現(xiàn)用，不能儲存太久，避免流動相生成雜質(zhì)微生物影響檢測；
f、流動相使用前先脫氣。
C18液相色譜柱污染再生技術(shù)：
色譜柱污染后，可以用合適的溶劑沖洗，使柱效再生。
常規(guī)的再生洗滌方法是：分別用甲醇、三氯甲烷、甲醇/水各60mL依次通過色譜柱，再用100%甲醇60mL平衡色譜柱后封存，柱效將恢復(fù)正常。必要時，根據(jù)柱污染性質(zhì)(如有機污染、鹽類污染等)，采用0.05mol/LH2SO4、0.5mol/LH3PO4或0.1mol/LEDTA鈉鹽沖洗，然后再用水沖洗，用100%甲醇平衡色譜柱后封存。對于嚴(yán)重污染的色譜柱，可采用水、甲醇、乙烷依次沖洗后，按順序倒過來再沖洗1次，每次所用溶劑60mL，不接檢測器，用甲醇平衡色譜柱封存。