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反相液相色譜柱如何選擇緩沖液PH值
反相液相色譜柱中緩沖體系PH值的選擇在反相液相色譜分析中，選擇正確的緩沖液PH值，對可離解的化合物分析的重現(xiàn)性十分重要，不恰當(dāng)?shù)腜H值可能導(dǎo)致不對稱峰，寬峰，分裂峰或肩峰，而尖銳的，對稱的峰是定量分析中獲得低的檢測限以，兩次分析之間較低的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)和保留時(shí)間的高重現(xiàn)性的前提。
反相液相色譜柱如何選擇緩沖液PH值
在選擇緩沖液PH值之前，應(yīng)先了解被分析物的Pka，高于或低于Pka兩個(gè)PH值單位的，有助于獲得好的、尖銳的峰，從HH公式：PH=Pka+log([A-]/[A])得知，溶液 PH值高于或低于Pka兩個(gè)單位，化合物中99%以一種形式存在，而一種形式存在的化合物才能獲得好的尖銳的峰。
如果選擇不到合適的，樣品的pKa與流動(dòng)相的pH非常接近，那么流動(dòng)相pH微小的變化，都會(huì)引起樣品保留時(shí)間較大的變動(dòng)。
當(dāng)化合物只有氨基時(shí)，緩沖體系的選擇十分簡單，大多數(shù)氨基化合物在PH值小于9時(shí)都被質(zhì)子化，所以所有PH值在7或更低的溶液均適合應(yīng)用，你也許會(huì)問水的 PH值大約是7，為什么還用緩沖鹽，因?yàn)榫彌_鹽有助于增加方法的可靠性，以及色譜峰的尖銳性，PH值的降低有助于氨基化合物保留的減弱，減小化合物與硅膠表面硅羥基的作用，而使峰更尖銳，任何緩沖液均可應(yīng)用于氨基化合物的分析，但我們認(rèn)為PH值等于3的磷酸鉀鹽適合用于氨基化合物的分析。
在上面兩個(gè)例子中，PH=3的磷酸鉀鹽都能獲得良好的應(yīng)用，在一般情況下，它是含羧基和氨基化合物分析中的緩沖液，并且我們認(rèn)為在氨基化合物分析中鉀鹽比鈉鹽更好。