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2020版藥典中新增的多維液相色譜究竟是“何方神圣”？
2020版藥典液相色譜法中新增了多維液相色譜，各位不了解的小伙伴快來看看吧
一維液相色譜的劣勢
色譜作為復(fù)雜混合物的分離工具，對(duì)化合物的分離分析發(fā)揮了很大的作用。目前使用的大多數(shù)儀器為一維色譜，使用一根柱子，適合于含幾十至幾百個(gè)物質(zhì)的樣品分析。當(dāng)樣品更復(fù)雜時(shí)，例如有人分析鹿茸蛋白，得到上千個(gè)色譜峰，可是經(jīng)質(zhì)譜定性表明，平均每個(gè)峰又含有二個(gè)組分，就要用到多維色譜技術(shù)。
多維液相色譜的優(yōu)勢
多維液相色譜又稱為色譜/色譜聯(lián)用技術(shù)，是采用匹配的接口將不同分離性能或特點(diǎn)的色譜連接起來，di一級(jí)色譜中未分離或需要分離富集的組分由接口轉(zhuǎn)移到第二級(jí)色譜中，第二級(jí)色譜仍需進(jìn)一步分離或分離富集的組分，也可以繼續(xù)通過接口轉(zhuǎn)移到第三級(jí)色譜中。
理論上，可以通過接口將任意級(jí)色譜串聯(lián)或并聯(lián)起來，直至將混合物樣品中所有的難分離、需富集的組分都分離或富集之。但實(shí)際上，一般只要選用兩個(gè)合適的色譜聯(lián)用就可以滿足絕大多數(shù)難分離混合物樣品的分離或富集要求。因此，一般的色譜/色譜聯(lián)用都是二級(jí)，即二維色譜。
圖1、二維液相色譜示意圖
二維液相色譜分類
在二維色譜的術(shù)語中，1D和2D分別指一維和二維；而¹D和²D則分別代表di一維和第二維。
二維液相色譜可以分為差異顯著的兩種類型。若兩種色譜的聯(lián)用僅是通過接口將前一級(jí)色譜中某一些組分傳遞到后一級(jí)色譜中繼續(xù)分離，這是中心切割式二維色譜(heart-cuttingmode two-dimensional chromatography)，一般用(LC-LC)表示。當(dāng)兩種色譜聯(lián)用，接口將前一級(jí)色譜中的全部組分連續(xù)地傳遞到后一級(jí)色譜中進(jìn)行分離，這種二維色譜稱為全二維色譜(comprehensive two-dimensional chromatograghy)一般用LC×LC表示。
LC×LC是將¹D色譜柱的流出物連續(xù)轉(zhuǎn)移至²D色譜柱。相比之下，LC-LC則是將¹D流出物選擇性地（部分地）轉(zhuǎn)移至²D色譜柱中。此外，這兩種類型下還有若干子類，包括選擇性二維色譜(sLC×LC)和多中心切割²D-LC(mLC-LC)。
LC-LC或LC×LC兩種二維色譜可以是相同的分離模式和類型，也可以是不同的分離模式和類型。接口技術(shù)是實(shí)現(xiàn)二維色譜分離的關(guān)鍵之一，原則上，只要有匹配的接口，任何模式和類型的色譜都可以聯(lián)用。
和一維色譜一樣，二維色譜也可以和質(zhì)譜、紅外和核磁共振等聯(lián)用。
SCX/RP二維液相色譜用于珠蛋白酶解產(chǎn)物分析
圖2、 SCX/RP高通量分析珠蛋白酶解產(chǎn)物
??di一維采用SCX強(qiáng)陽離子交換色譜柱，流動(dòng)相A為5mM NaH2PO4+1%乙腈，B為A+1.0mol/L NH4Cl，流動(dòng)相pH4.0。
??第二維采用兩支相同的C18常規(guī)反相色譜柱，流動(dòng)相A為含0.1%TFA的水溶液，B為含0.1%TFA的乙腈。
樣品進(jìn)入陽離子交換色譜，由SCX流動(dòng)相逐步增加鹽濃度間斷洗脫，通過接口的有效轉(zhuǎn)移將SCX洗脫的產(chǎn)物導(dǎo)入第二維反相色譜中進(jìn)一步分離。
在選定實(shí)驗(yàn)條件下的二維分析結(jié)果，在離子交換色譜和反相色譜構(gòu)成的二維液相色譜系統(tǒng)中，因離子交換色譜較高的柱容量通常作為di一維系統(tǒng)，而反相色譜與離子交換色譜流動(dòng)相有較好的兼容性及較高的分辨率常作為第二維系統(tǒng)。
由于SCX對(duì)樣品的切割分離，二維分離的結(jié)果大大降低了樣品分析的復(fù)雜性。同時(shí)由于二維分離機(jī)理的正交性，進(jìn)一步拓寬了樣品的分離空間，增強(qiáng)了系統(tǒng)的分離能力。在分析珠蛋白酶解產(chǎn)物中，di一維離子交換切割次數(shù)為19次，由圖2可知第二維反相色譜峰容量為174，這種臺(tái)階式洗脫切割方法峰容量為di一維切割次數(shù)乘以第二維峰容量，因此SCX/RP二維液相色譜的峰容量可達(dá)到3306。