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SPL-103350共聚焦培養(yǎng)皿,PS/玻璃,白色,20Ø,鋸齒邊,無菌說明

2023-8-1 閱讀(938)

共聚焦爬片培養(yǎng)貼壁細胞實驗步驟


實驗準備:
1. 提前半小時在37°C預熱培養(yǎng)基、PBS、胰酶。
2. 準備2mL和10mL移液管、1.5mL離心管、等相關材料。
實驗方法:
1.從培養(yǎng)箱中取出,鏡下觀察細胞狀態(tài):密度、細胞形態(tài)、貼壁情況等。
2.在超凈臺內,放入預熱好的培養(yǎng)基、PBS和胰酶。點酒精燈,燒培養(yǎng)皿口,將原培養(yǎng)基吸掉。
3.加入適量PBS至培養(yǎng)皿底部,前后輕柔搖勻,清洗細胞。
4.去掉PBS,加入適量胰酶,靜置5-10min(時間和量根據(jù)不同細胞調整)。注意,胰酶需要預先調配好。
5.終止消化:若消化下來,在底部加適量培養(yǎng)基(根據(jù)觀察的細胞密度決定)終止消化,并用槍輕柔吹打多次,將壁上剩余細胞吹打下來,均勻后取少量計數(shù)。
6.根據(jù)需要的量稀釋細胞,細胞懸液滴滿共聚焦爬片表面后,放入培養(yǎng)箱,30分鐘左右細胞附著到爬片后,再沿內壁添加培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng)。
7.細胞培養(yǎng)好后,吸取掉廢液,用鑷子夾在支架側面,取出支架。
8.雙手捏住支架兩側輕輕一拉即可輕松取出爬片,繼續(xù)接下來的培養(yǎng)實驗。

注意事項:
1.操作時需注意無菌操作,盡量避免污染。
2.確保培養(yǎng)皿的液體不要沾到瓶口,每次打開瓶口都需要用酒精燈消毒。
3.因為貼壁細胞更脆弱,因此放入培養(yǎng)皿中的液體都需要37°C 預熱。
4.共聚焦爬片傾斜30°以上,輕拉,防止拉開一瞬間爬片掉落,防止爬片破裂。
5.共聚焦爬片為一次性產品,不可重復使用,爬片區(qū)分正反面,拆開即用!

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