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采用化學(xué)標(biāo)記和MALDI MSn質(zhì)譜分析法進(jìn)行多糖結(jié)構(gòu)分析
摘要
背景：
人體中，多糖在糖蛋白的功能中起著重要作用。目前，由于多糖分析程序消耗時(shí)間和勞動(dòng)，詳細(xì)的結(jié)構(gòu)分析非常具有挑戰(zhàn)性，通常涉及多步驟序列處理、HPLC或電泳提純、以及質(zhì)譜分析。
方法：
在此項(xiàng)研究中，采用了一臺(tái)AXIMA-Resonance?儀器來生成MALDI-IT-TOF- MSn譜圖，以便在無需多步驟分離或酶處理?xiàng)l件下進(jìn)行多糖序列分析。我們采用了MSn質(zhì)譜分析法來監(jiān)控多糖的氧化。
結(jié)果：
MSn數(shù)據(jù)表明，溫和的氧化條件可特異性氧化唾液酸。結(jié)合碳水化合物氧化反應(yīng)和MSn分析結(jié)果，我們能夠監(jiān)控唾液酸化的氧化反應(yīng)和寡糖的連接。
1.方法和結(jié)果
圖1. 多糖氧化示意圖
圖2. 多糖和糖蛋白高度特異性分析的質(zhì)譜分析法示意圖
表1. 四種寡糖G1-G4及其氧化產(chǎn)物的質(zhì)荷比。
MS譜圖顯示了不同氧化條件下的反應(yīng)產(chǎn)物。
采用MSn檢測(cè)來監(jiān)控氧化反應(yīng)條件
圖3. MS譜圖顯示了不同氧化條件下的反應(yīng)產(chǎn)物
片段峰的擴(kuò)大
圖4. 采用MS識(shí)別1337和1339的多糖結(jié)構(gòu)
圖5采用MSn氧化聚糖檢測(cè)技術(shù)識(shí)別的聚糖和氧化產(chǎn)物結(jié)構(gòu)列表
總結(jié)
溫和氧化條件能夠特異性氧化碳水化合物鏈末端的唾液酸基團(tuán)。因此，可以測(cè)定唾液酸化的多糖。
MSn分析能夠在無需標(biāo)記和糖苷酶處理?xiàng)l件下檢測(cè)多糖構(gòu)成和序列信息。
MSn數(shù)據(jù)能夠指明氧化位點(diǎn)以及多糖的連接。
參考文獻(xiàn)
Zhang H, Li XJ, Martin DB, Aebersold R.Nat Biotechnol.2003, 21(6), 660-666.
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Van Lenten L. and Ashwell.J. G. Biol.Chem.1971, 246, 1889–1894
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