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長(zhǎng)期和短期保藏菌種的方法介紹

閱讀:1292      發(fā)布時(shí)間:2024-3-25
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菌種保藏是指保持微生物菌株的活力和遺傳性狀的技術(shù)。微生物在使用和傳代過(guò)程中容易發(fā)生污染、變異甚至死亡,因而常常造成菌種的衰退。菌種保藏的目的就是使菌株存活、不丟失、不污染雜菌、不發(fā)生或少發(fā)生變異,保持菌種原有的活性和各種特征。菌種保藏的基本原理是使微生物的生命活動(dòng)處于半休眠狀態(tài),也就是將微生物的新陳代謝作用限制在低范圍內(nèi)。

菌種保藏的方法很多,但原理大同小異。
首先要挑選優(yōu)良純種。利用微生物的孢子、芽孢及營(yíng)養(yǎng)體;
其次,根據(jù)其生理、生化性,人為創(chuàng)造低溫、干燥或缺氧等條件,抑制微生物的代謝作用,使其生命活動(dòng)降低到極低的程度或處于休眠狀態(tài),從而延長(zhǎng)菌種生命以及使菌種保持原有的形狀,防止變異。不管采用哪種保藏方法,在菌種保存過(guò)程中要求不死亡、不污染雜菌和不退化。
短期:斜面保藏
斜面保藏是目前常用的短期保藏法,操作簡(jiǎn)單,使用方便,但需定期接種。因此工作量較大,而且傳代次數(shù)多易發(fā)生變異,因此,僅適用于短期經(jīng)常使用的菌種。
1. 配制培養(yǎng)基,營(yíng)養(yǎng)成分濃度稍低為宜,特別是糖類盡可能降低,產(chǎn)酸菌種,則應(yīng)添加少量碳酸鈣;
2. 斜面裝液量,斜面以傾斜后不超過(guò)試管長(zhǎng)度1/2為宜;
3. 斜面培養(yǎng),溫度較最適稍低,時(shí)間較最適略長(zhǎng);
4. 生長(zhǎng)完成后,密封置于2~8℃的低溫培養(yǎng)箱中保藏。每傳代一次,霉菌、放線菌及有芽孢的細(xì)菌可保存1~3個(gè)月,酵母菌2個(gè)月,細(xì)菌1個(gè)月。
活化使用:
將斜面從
低溫培養(yǎng)箱中取出,細(xì)菌挑取菌落增菌,或霉菌切塊傳代培養(yǎng),培養(yǎng)好即可使用。

長(zhǎng)期:冷凍保藏
冷凍保藏是目前使用較為廣泛的長(zhǎng)期保藏法之一,適用于所各類微生物,較之于斜面保藏,減少了工作量,延長(zhǎng)了保藏時(shí)間。
1. 準(zhǔn)備斜面或平板新鮮培養(yǎng)物一個(gè),10%的無(wú)菌甘油溶液;
2. 用甘油溶液將菌體或孢子洗脫下來(lái),形成菌懸液;
3. 菌懸液分裝,凍存管裝液1mL/支,后置于程序降溫盒;
4. 將程序降溫盒置于-80℃冰箱凍存;
5. 可保藏1-2年。
活化使用:
1. 將凍存菌株置于凍存盒中取出,準(zhǔn)備水浴溶解,切勿常溫融化;
2. 將菌株迅速置于水浴速溶,細(xì)菌40℃,真菌30℃,約 2min全部溶解后接種到適宜培養(yǎng)基;
3. 采用適宜條件培養(yǎng)完成即可。

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