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2015年5月Nature文章“BLAME IT ON THE ANTIBODIES”為整個科研屆敲響了一次警鐘?？贵w選擇不當會使實驗室遭遇“重復性危機”，甚至是“毀滅性”結果！

面對市場上超過300家的抗體公司，200多萬種的抗體?？贵w質量參差不齊，服務水平差距明顯，科研者們該如何選擇？

HPA金標抗體除了具有高特異性/低交叉反應的優(yōu)點，每種抗體均有超過700多張IHC、IF和WB圖片驗證數據，可謂理想的實驗選擇。

   
什么是HPA金標抗體？

The Human Protein Atlas是一個公共門戶，隸屬于人類蛋白質組學研究項目。該項目的目標是生產覆蓋全基因組所有基因的抗體，系統(tǒng)性地探索人類蛋白質組奧秘。該項目的完成取決于高通量金標抗體生產技術與高質量的蛋白表達譜(多種人類組織和細胞獲得)的結合。目前HPA已公布1.8萬多種抗體，每種抗體均有超過700多張IHC、IF和WB圖片驗證數據，被稱為：HPA金標抗體。

    
為什么稱之為HPA金標抗體？

HPA金標抗體（Prestige Antibodies）是具有高度特異性的抗體，其抗體應用經過全面驗證，所有特異性驗證數據都可以在Human Protein Atlas (HPA) Portal (proteinatlas.org)獲得。金標抗體的高度特異性/低交叉反應主要基于以下幾個方面的質量控制：1. 抗原序列(位置)選擇；2. 多克隆抗體親和層析純化；3. 多種實驗方法驗證；4. 金標抗體嚴格審批流程。

   
1.抗原選擇

HPA金標抗體的免疫抗原是重組人蛋白表位識別標簽(PrESTs)，表位識別標簽一般含有50-150個氨基酸。表位識別標簽經過設計和篩選，使得它們含有*的表位，并且適合激發(fā)高特異性的抗體。通過對人全基因組掃描的方式，確保用于生產抗體的蛋白表位識別標簽與其它蛋白有zui低的同源性。同時，抗原表位還會排除信號肽和蛋白跨膜區(qū)。

   
2.親和層析純化

HPA金標抗體通過親和層析方式進行純化(以PrESTs抗原作為配基)，采用三步法免疫層析的純化工藝：HisABP特異性標簽去除，PrESTs特異性捕獲，zui后通過排阻色譜進行緩沖液的交換，不僅保證了抗體的純度，同時有利于抗體長期保存。

   
3.多種實驗方法驗證

    
·  蛋白芯片

金標抗體的特異性和純度首先經過蛋白芯片來驗證。一系列重組人蛋白表位識別標簽(PrESTs)標記在微矩陣芯片上，通過熒光信號確定抗體的特異性。

     
·  免疫組化 (IHC)

免疫組化驗證主要是對目標蛋白的檢測以及其在組織、細胞和亞細胞水平的定位實驗。金標抗體需要在46個正常人類組織(每個實驗重復3次)、432個人腫瘤組織樣本中(20種常見腫瘤組織，每種腫瘤組織來源于不同病人，zui多的一種腫瘤樣本來源于12個不同的病人)做蛋白表達分析。此外，還有56種細胞系的免疫染色實驗數據。

     
·  Western Blot (WB)

金標抗體還需通過對肝臟和扁桃體組織提取物、去除IgG和白蛋白的混合血漿以及兩種人類細胞系中的蛋白表達進行WB驗證。此外，金標抗體還要在過表達的體系中做WB驗證。

    
·  免疫熒光 (IF)

金標抗體需要通過的人類三個細胞系中(U-2 OS, A-431和U-251 MG)做亞細胞定位的免疫熒光驗證，以獲得更詳細的亞細胞定位信息。同時，也會有轉錄水平的驗證，以確保金標抗體實驗結果的準確性。

    
注釋：

正常組織、腫瘤組織和細胞的免疫組化圖片都會經過病理學家的檢驗和注釋。同時，針對不同的目的蛋白，金標抗體驗證的免疫組化、WB和免疫熒光的實驗數據也會和發(fā)表文獻以及生物信息學的數據作比較，以確保驗證數據的準確性。

       
4.嚴格的審批流程

金標抗體認證通過必須是綜合考慮免疫組化、WB和免疫熒光的實驗驗證結果以及生物信息學和參考文獻。HPA項目有時候針對同一個蛋白也會生產一對抗體，彼此之間抗原表位不同，兩個抗體之間相互驗證。大多數情況下，這兩個抗體的IHC驗證數據是一致的，如果IHC結果有差異，可能存在蛋白異構體的現象，例如不同的拼接體或者翻譯后修飾。超過一半的金標抗體通過嚴謹的實驗驗證、實驗數據與文獻或者生物信息學預測的結果是一致的，這部分金標抗體就會通過認證，在HPA公布。

    
HPA金標抗體能為你的實驗帶來什么？
高特異性的實驗結果：金標抗體均通過嚴格抗原序列比對篩選
豐富的實驗驗證圖片：每一支金標抗體都經過蛋白芯片、免疫組化、WB和免疫熒光的實驗驗證。
嚴謹的參考文獻和生物信息學預測：每一支金標抗體除了實驗驗證，發(fā)表文獻和生物信息學預測也是抗體的重要參數。

HPA金標抗體應用舉例

下圖為抑癌基因ARID1A (抗體貨號：HPA005456)在不同組織和細胞系中的表達和分布。

   
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