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HE染色經(jīng)驗(yàn)總結(jié)
的HE染色切片應(yīng)該具備切片完整、無皺褶、細(xì)胞核著色清晰呈藍(lán)色、細(xì)胞質(zhì)呈鮮紅色、核仁核膜核內(nèi)染色質(zhì)顆粒清晰，核質(zhì)藍(lán)紅分明、對比清晰、透明度好等屬性；劣質(zhì)的HE染色切片會出現(xiàn)切片不完整，染色灰暗，紅藍(lán)對比不明顯，有甚者染色后的切片鏡下呈云霧狀、組織結(jié)構(gòu)不清楚等狀況，對于科研黨和病理檢驗(yàn)工作者來說，想要一張好的組織HE染色圖，看似簡單但也不簡單。目前，我們收集了一些導(dǎo)致組織切片染色不佳的原因及解決辦法，希望對大家的科研工作有一定的幫助。
1．切片污染：包括染液的污染和組織污染
所謂染色的污染，是由于蘇木精染液的氧化膜或伊紅染液的絮狀沉淀和其他試劑中的沉淀物所致。污染物遮蓋該部位的細(xì)胞或組織而難以觀察期形態(tài)改變。這種污染可通過定期的過濾各種染液和試劑而避免。而所謂的組織污染是由于切片和貼片過程中，被其他病例的組織和細(xì)胞污染。如果是不同類型的組織，容易在顯微鏡下發(fā)現(xiàn)；如果是相同類型而不同病變的組織污染，不容易在鏡下發(fā)現(xiàn)，可導(dǎo)致誤診。因此在攤片時(shí)要非常小心，恒溫貼片盆的水要常常更換或于每例貼片后用紙?jiān)谒婕皶r(shí)把殘余的蠟片拖走，以保證不污染。還有，取材時(shí)也可能造成組織污染，在甲例取材后，如不及時(shí)把取材臺和刀剪沖洗干凈，若留下殘余組織，在乙例取材時(shí)把甲例的殘余組織誤作為乙例取材，同時(shí)放進(jìn)脫水盒內(nèi)，這樣同一切片內(nèi)，包括甲乙兩例組織，這種組織污染也可產(chǎn)生嚴(yán)重后果。
2．細(xì)胞核染色蒼白、暗淡，蘇木素染色過淺
造成此類問題的原因可能有3個(gè)，切片在蘇木精染色液停留時(shí)間過短，蘇木素染色液過度氧化，失去染色能力，鹽酸酒精的分化步驟處理時(shí)間過長。此類問題可以更換新的蘇木素及調(diào)節(jié)染色和分化時(shí)間來解決。
3．染色不均勻不透亮呈霧化狀態(tài)
即部分組織和細(xì)胞染色尚可，部分組織模糊不清楚，這種染色組織無法診斷。其原因是由于染色時(shí)二甲苯脫蠟不*，導(dǎo)致組織處理不當(dāng)。常見于冬季室溫低時(shí)，二甲苯的脫蠟?zāi)芰档?，或使用多次脫蠟的二甲苯所致，克服辦法是在冬季室溫低時(shí)(14℃以下)，把二甲苯缸在水浴缸中適當(dāng)加溫到30℃再脫蠟，或更換新的二甲苯。
4．切片在脫蠟后出現(xiàn)大片白色的斑點(diǎn)
由于烤片溫度太低，玻片在脫蠟前沒有充分烤干凈組織中的石蠟；切片在二甲苯停留時(shí)間不足，或二甲苯使用過久，造成脫蠟不盡。若烤片時(shí)間過短，則可能導(dǎo)致切片脫落的現(xiàn)象。出現(xiàn)白色斑點(diǎn)是由于切片在二甲苯停留時(shí)間不足或脫蠟用的二甲苯使用過久造成，此時(shí)切片可以退回到二甲苯停留時(shí)間相對長些，或更換新的二甲苯，然后進(jìn)行重新染色程序的染色。
5．細(xì)胞核呈紅、棕色改變
主要是由蘇木素染色液的過度氧化和切片在蘇木素染色后返藍(lán)不足造成。該問題可更換新的蘇木素和氨水返藍(lán)液來解決。
6．細(xì)胞核呈灰黑色樣改變俗稱胞核碳化
可能的原因是由于脫水機(jī)處理組織的過程中溫度過高、過熱，或者在石蠟里停留的時(shí)間過長；或固定的時(shí)間太短，接著就直接在高濃度的乙醇中行脫水處理，脫水過度造成?；蛘呤乔衅旧瓿珊蠓馄胺胖迷诳諝庵袝r(shí)間過久，以至于二甲苯揮發(fā)后切片過度干燥所致。此類問題的解決辦法是移去組織切片上的蓋玻片和封固劑，重新逆序處理至水化。然后重新經(jīng)染色程序染色后未等切片干燥就及時(shí)封片(又稱濕封)；或者經(jīng)重新切片后染色封片。