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微生物實驗室無菌操作技術(shù)規(guī)范
1. 目的
規(guī)范無菌操作流程，減少及避免發(fā)生染菌現(xiàn)象出現(xiàn)。
2. 使用范圍
無菌室及潔凈區(qū)的操作。
3. 無菌操作技術(shù)原則
3.1 環(huán)境要清潔，在每次無菌操作結(jié)束后都需要對環(huán)境進行清理、清洗；且避免操作前進行
清掃。
3.2 做好個人衛(wèi)生，進入無菌室前需修剪指甲、洗手，穿好無菌服，帽子需遮住所有頭發(fā)，
口罩遮住口鼻。
3.3 在無菌操作時，不可講話，打噴嚏，對懷疑染菌的無菌物品，不可使用。
4. 內(nèi)容
4.1.1準備：工作人員著裝整潔，洗手、戴口罩、修剪指甲；備齊用物（如：接種針、接種環(huán)、酒精燈、斜面、平皿、搖瓶、75%酒精棉、無菌水等）；核對無菌用品，接種菌種的種類、型號。
4.1.2 所有實驗使用的物品都需要進行消毒、滅殺；進入潔凈區(qū)前需要經(jīng)傳遞窗進行紫外表面消毒30min以上；
4.1.3 開始實驗前需要打開超凈臺的紫外燈，消毒半個小時以上；超凈臺避免放入過多的物品（一般只放入當次的實驗所有的物品），所使用的試劑和耗材都需事先進行滅菌（滅菌日期超過4天的需重新消毒）。
4.1.4 進入潔凈區(qū)前關(guān)閉紫外燈，并打開風機，等待半個小時以上，使臭氧盡量排放干凈。 4.1.5 除去手腕等部位的飾品，穿好無菌服，戴好頭套、口罩，做到“三不漏”：不暴漏頭發(fā)，不暴漏口鼻，不暴漏軀干皮膚和衣物。 4.1.6雙手要進行清洗、消毒。
4.1.7要經(jīng)風淋室風淋30秒后再進入潔凈室。 4.1.8在局部百級區(qū)域操作要戴一次性無菌手套。 4.1.9 實驗操作過程中應(yīng)盡量減少進入潔凈區(qū)的人員（不超過4人/間）并盡量減少人員走動。 4.1.10 所有要放入超凈工作臺的物品都需進過消毒液噴灑擦拭消毒。
4.1.11無菌物品若取離超凈臺則視為已污染，不得放回再用；無菌液體在取離超凈臺前必須密封其開口；密封的無菌液體容器在放入超凈臺后，對其開口前須對開口在酒精燈火焰上燒烤。
4.1.12在拆開任何一次性無菌使用耗材的包裝時都要在超凈臺內(nèi)完成，并須同時保證與細菌直接接觸的使用端/面不得與超凈臺內(nèi)的任何物品發(fā)生觸碰。 4.1.13工作臺面上的用品要放置有序、布局合理，一般說酒精燈（當工作不需要時也可不用）在中間，右手使用的物品在右側(cè)，左手使用的物品在左側(cè)。工作時忌忙亂而要有序。 4.1.14 開始操作前先用醫(yī)用酒精對雙手進行消毒。 4.1.15點燃潔凈工作臺內(nèi)的酒精燈，在打開/關(guān)閉試劑瓶口、試管口時應(yīng)將瓶口或者試管口過火；接種針、接種環(huán)在使用前或在與臺面發(fā)生碰觸后應(yīng)經(jīng)過火焰的灼燒；接種針/接種環(huán)過火操作方法為：使其頭部到身部反正面在火焰上各烤燎通紅；燒過的器械要冷卻后才能使用，以免對細菌造成損傷。
4.1.16操作前試管（或搖瓶）口需要在火焰上方反轉(zhuǎn)鐐銬兩周。 4.1.17操作時左手拿試管（或搖瓶），右手拇指、食指、中指操作接種針（接種環(huán)），右手小指和無名指夾住瓶塞，取下瓶塞，瓶塞再反轉(zhuǎn)鐐銬兩周后開始操作。 4.1.18在超凈臺內(nèi)，盡量避免瓶口長時間敞開直立。
4.1.19蓋封瓶口時，應(yīng)將瓶口和瓶蓋內(nèi)面各自在火焰上燎烤兩周再蓋上瓶蓋。
4.1.20實驗用膠塞、橡皮乳頭等橡膠和塑料用品在過火焰時也不能時間過長，以免燒焦產(chǎn)生有毒氣體，危害培養(yǎng)的細胞。 4.2 無菌液體標準轉(zhuǎn)移程序：
4.2.1無菌液體的轉(zhuǎn)移須在超凈臺進行，轉(zhuǎn)移過程要盡量保持密閉，必須用移液管或移液器來完成操作；
4.2.2 移液管上方口應(yīng)塞入棉絮（脫脂棉），用牛皮紙包好進行消毒滅殺；
4.2.3無菌液體瓶再封口時，須將瓶口和瓶蓋分別燎烤2周后再封蓋；封蓋后須貼上相應(yīng)的標簽；
4.2.4在使用移液管轉(zhuǎn)移液體時，應(yīng)保證移液管距移液器邊緣1cm以上；在使用移液管時，每次液體吸入量不應(yīng)超過移液管的警示標記，更不能觸及移液管上方的防塵棉絮；在使用移液管移出廢液時，移液管應(yīng)距廢液缸5cm以上；在將細胞懸液轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶中時，移液管應(yīng)距培養(yǎng)瓶0.5cm以上；
4.2.5放置吸管時管口應(yīng)向下傾斜，以防液體倒流入橡皮乳頭內(nèi)而引起污染或者損壞電動移液槍；
4.2.6向離心管、細胞凍存管、培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿內(nèi)添加液態(tài)物質(zhì)時，所加入的量不應(yīng)超過管上所標示的zui大量；
4.2.7實驗人員在操作時，應(yīng)保證開口離心管或開口試劑的上方為不可逾越區(qū)；嚴格禁止采用雙臂交叉的方式來拿取尚在開口狀態(tài)的離心管或試劑瓶；在面向操作臺工作時勿大聲講話或咳嗽，以免噴出的唾沫把細菌帶入工作臺面發(fā)生污染；
4.2.8在使用細胞刮刀時，手握部位應(yīng)盡量遠離培養(yǎng)瓶口，以防污染；
4.2.9如果在轉(zhuǎn)移任何液態(tài)物質(zhì)的過程中出現(xiàn)滴漏，則應(yīng)立即使用消毒液浸泡的棉球或紗布擦凈；
4.2.10使用完畢的實驗耗材應(yīng)在*時間內(nèi)處理完畢，避免堆積在超凈臺內(nèi)或?qū)恿髡稚?，以防污染?nbsp;
4.2.11當所有操作完成后，應(yīng)及時使用消毒液對臺面進行清理；擦拭完畢后再開啟紫外燈照射一個小時。