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上海拜力生物科技有限公司

探針合成|實驗技術(shù)服務(wù)

時間:2015-9-1閱讀:87

關(guān)鍵詞:探針合成|實驗技術(shù)服務(wù)
簡介:世界*品牌探針合成|實驗技術(shù)服務(wù)原裝,質(zhì)量保證,*。
探針合成|實驗技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
我們具備豐富的蛋白表達設(shè)計經(jīng)驗及實驗操作技巧,承諾客戶不成功不收費。我們所有的實驗數(shù)據(jù)真實可信,我們提供原始的表達菌株和克隆質(zhì)粒,客戶可以依據(jù)我們的實驗報告重復我們的實驗結(jié)果。
產(chǎn)品品牌:   
測序?qū)嶒灹鞒蹋?br>1、  合成cDNA步驟
(1)    加入從卵巢癌細胞或組織中提取的總RNA ≥ 5ug。
(2)    加入 Nuclease-free 水 75 ul
(3)    加入 5x iScript Reaction Mix,按20 ul/ 100ul 比例加入。
(4)    加入 iScript RT,5 ul.
(5)    在pcr儀上,按以下步驟進行加熱:
5 minutes at 25°C;30 minutes at 42°C;5 minutes at 85°C。
儲存在 –20C冰箱。
2、  擴增ERCC2目的片段
(1)   訂購ERCC2引物,序列如下:
F:5'-CCGctcgagGCTCCTGGTCTACTTCCCGTACG-3'
R:5'-ATTTgcggccGCACGCAGCCGCCACTTCACGTAC-3'
(2)   準備反應液:
按以下試劑比例進行反應MIX的配置:
10x reaction buffer                            5 ul (1x)
dNTPs (stock 10 mM)                            1.0 ul (200uM
Forward primer (250uM)                        1.0 ul (0.2 uM)
Reverse primer (250 uM)                     1.0 ul ( 0.2 uM)
cDNA template                             1 ul  (1 ug)
Taq PCR Polymerase enzyme                  0.5 ul
ddH20                                        up to     50 ul
Total                                                50 ul
(3)   PCR 反應過程
1)        準備PCR儀,并檢查是否可用。
2)        打開PCR儀頂蓋,將96PCR板放置在加熱模塊上蓋緊頂蓋;
3)        選擇程序如下:
1cycle:94’C,3 min  
35 cycles: 94’C,30s;62’C,1 min;72’C,1.5 min             
1cycle:72’C,7 min;4’C    forever

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