液體樣本甘油含量測定試劑盒

描述：甘油是甘油三酯的水解產(chǎn)物。脂蛋白酯酶能夠水解血液中的甘油三酯；胰脂酶可以水解食物中的甘油三酯；激素敏感脂肪分解酶能夠水解脂肪細胞中的甘油三酯。與游離脂肪酸一樣，甘油含量是甘油三酯水解反應(yīng)的可靠檢測指標，但檢測更加方便。本試劑盒采用甘油磷酸氧化酶法與經(jīng)典的GPO-Trinder 酶學反應(yīng)方法，通過比色測定液體樣本中的甘油含量。經(jīng)過優(yōu)化后，操作步驟更加簡單，檢測線性范圍在10-1200µmol/L，可靠性和重復(fù)性俱佳，適合生物醫(yī)學、食品實驗室檢測。

原理：在 ATP 存在下甘油被甘油激酶磷酸化為 3- 磷酸甘油，再被甘油磷酸氧化酶氧化產(chǎn)生過氧化

氫；在過氧化物酶作用下生色底物轉(zhuǎn)化為苯醌亞胺，其光密度值與甘油濃度成正比。

 適用范圍：測定血液，細胞培養(yǎng)基、體液、酒類飲料中的甘油濃度。

 組成： (105 次微板測定或 30 次 1 ml 比色杯測定)：

(1) R1 試劑 40 ml

(2) R2 試劑 10 ml

(3) 4 mmol/L 甘油標準品 1 ml ，4 ℃，儲存6 月。

操作步驟：

一 樣本處理：

1.       酒類、飲品、清澈液體樣本：可直接進行測定，如超過線性范圍可用蒸餾水或生理鹽水稀釋后再進行測定。

2.       培養(yǎng)液：取不含酚紅、無顏色、無血清的細胞培養(yǎng)基，如有細胞碎片應(yīng)4ºC,，12,000g離心5min,取上清進行測定。

3.       血液：對于新鮮抗凝血而言，可4ºC，2,000g離心5min得到血漿；而對于非抗凝血來說，可先4ºC靜置2h得到血清后，2000g離心10min,除去血細胞。將得到的血漿/血清70ºC 加熱10分鐘滅活內(nèi)源脂肪酶，12,000g離心10min ,去上清進行測定或-20ºC保存。

二 工作溶液配制：按4:1比例，取4 ml試劑R1與1 ml試劑R2混合即可，立即使用或4ºC保存<1天，變色棄去。

 三 標準品稀釋：用蒸餾水、生理鹽水或與樣品緩沖液一致的液體，將4 mM甘油標準品倍比稀釋為1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625、7.8125 µmol/L，通常取其中4~6管即可，注意設(shè)置0濃度對照反應(yīng)管。

四 甘油濃度測定：

1.       加樣。為使反應(yīng)時間盡量一致，減小實驗誤差，可先加入標準品、待測樣品，然后再加入工作溶液。（注意：當甘油濃度較低時，可將待測樣品與工作溶液按照100µl:100µl體積進行混合，然后再進行測定，但是如果樣品體積超過100µl時將會稀釋工作液中酶的濃度，致使反應(yīng)靈敏度下降。如果待測樣品濃度超過線性范圍的時候，可進行適當稀釋，然后根據(jù)稀釋倍數(shù)來計算樣品中甘油濃度。）

2.       37ºC或25ºC反應(yīng) 15分鐘。反應(yīng)平衡后顏色在60分鐘內(nèi)穩(wěn)定。

3.       先用蒸餾水+工作液的空白管調(diào)零，然后測定各管OD值。

繪制標準曲線并計算甘油濃度。附Excel作圖步驟：各標準管OD值為y軸，標準品濃度為x軸。(1)鼠標左鍵圈住數(shù)據(jù)，點擊做圖向?qū)Вx擇-散點圖-，點擊-完成-。(2)鼠標右鍵點圖上的某一點，點擊-添加趨勢線-，點擊-選項-，點擊-顯示公式-和-R²值-。