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尺寸排阻色譜柱在使用過程中可能會遇到以下常見問題

閱讀:596      發(fā)布時(shí)間:2025-2-3
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  尺寸排阻色譜柱是一種廣泛應(yīng)用于生物分析領(lǐng)域的工具,其工作原理主要基于分子大小差異進(jìn)行分離。利用柱內(nèi)固定相中孔隙與分子間的物理作用來實(shí)現(xiàn)分離。具體來說,聚合物分子在柱子中的孔道中被篩選,較大的分子無法通過尺寸較小的孔道,只有較小的分子才能通過這些孔道,從而實(shí)現(xiàn)不同分子尺寸的分離。其優(yōu)點(diǎn)在于其分離速度快、操作簡單、分離效果好。此外,該技術(shù)不依賴于分子之間的親和性或化學(xué)性質(zhì),因此適用于各種生物大分子,如蛋白質(zhì)、多肽和核酸等的分離。
  尺寸排阻色譜柱在使用過程中可能會遇到以下一些常見問題:
  1、柱效與峰形問題
  柱效下降:可能是由于樣品與流動相未過濾,雜質(zhì)堵塞柱子導(dǎo)致。若出現(xiàn)此現(xiàn)象,需用合適的溶劑沖洗柱子,如參考說明書、操作手冊等文件進(jìn)行沖洗操作。另外,若使用的流動相含有有機(jī)溶劑,也可能導(dǎo)致柱效下降。
  峰形異常:包括峰型變寬、分岔、分離度下降等。這可能是進(jìn)樣量超過柱體積的5%,或樣品濃度過高、粘度大,使樣品無法以同一速度通過色譜柱,產(chǎn)生“指形效應(yīng)”。此時(shí)應(yīng)控制進(jìn)樣量和樣品濃度,保證樣品粘度與流動相一致。
  出現(xiàn)鬼峰:若不是溶劑與流動相差異導(dǎo)致的基線波動,需通過排除法,如進(jìn)空白溶劑、換柱子等,找到雜峰、鬼峰的來源并解決。
  毛刺峰:通常是柱身中進(jìn)了空氣所致,可通過長時(shí)間低流速的流動相沖洗去除氣泡。
  2、保留時(shí)間漂移問題
  流動相因素:若流速穩(wěn)定,可能是流動相未完q混勻,導(dǎo)致洗脫強(qiáng)度不斷變化從而使保留時(shí)間漂移。需確保流動相充分混合均勻后再進(jìn)行分析。
  系統(tǒng)故障:若流速和壓力不穩(wěn)定,可能是儀器泵液系統(tǒng)產(chǎn)生漏液、故障等問題,需要實(shí)際排查修復(fù)。
  3、色譜柱堵塞與柱壓問題
  柱頭篩板堵塞:如果柱頭篩板處堵塞導(dǎo)致柱壓接近柱壓上限,可以通過反向沖洗色譜柱來解決,但要注意將流出液體直接排至廢液桶防止二次污染。常規(guī)的由雜質(zhì)吸附填料引起的壓力升高,可通過正向沖洗掉雜質(zhì)來解決。
  壓力超限:可能超過了色譜柱的最大耐壓,導(dǎo)致填料被壓實(shí)或損壞,影響分離效果和柱壽命。應(yīng)立即降低壓力,檢查并更換受損部件。
  4、使用壽命問題
  雜質(zhì)影響:樣品和流動相中的雜質(zhì)會堵塞柱子,縮短其壽命。因此樣品與流動相進(jìn)樣前必須過濾,流動相建議現(xiàn)配現(xiàn)用。
  使用不當(dāng):如在不適當(dāng)?shù)膒H值、緩沖液種類或鹽濃度下操作,以及在極d溫度或壓力條件下使用等,都可能損害色譜柱。應(yīng)嚴(yán)格按照操作規(guī)程使用和維護(hù)色譜柱。
  5、溶劑相關(guān)問題
  溶劑不匹配:樣品溶劑與流動相的不一致可能會導(dǎo)致不同程度的干擾,嚴(yán)重時(shí)會影響分離效果。一般要求溶劑與流動相完q一致,或通過稀釋盡量保持接近。

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