HPLC中使用的流動(dòng)相直接影響樣品中組分的保留和差異遷移，從而對(duì)樣品的分離產(chǎn)生深遠(yuǎn)的影響。因此，正確且盡可能一致地進(jìn)行流動(dòng)相制備至關(guān)重要。以下是流動(dòng)相制備的一些提示和技巧，可確保分離和分析的*高準(zhǔn)確度。
使用簡(jiǎn)單的流動(dòng)相
使用簡(jiǎn)單的流動(dòng)相將獲得更穩(wěn)定、更易于轉(zhuǎn)移的方法。這些方法使組織受益，因?yàn)楫?dāng)實(shí)施可靠的方法時(shí)，故障排除和停機(jī)時(shí)間將降至最·低。
使用適當(dāng)?shù)燃?jí)的溶劑和試劑
構(gòu)成流動(dòng)相的組分必須具有最高純度，這一點(diǎn)至關(guān)重要。對(duì)于溶劑，應(yīng)根據(jù)應(yīng)用使用正確的牌號(hào)。當(dāng)涉及到試劑時(shí)，它們必須具有高純度并且不超過(guò)有效期。
基于重量的流動(dòng)相制備基礎(chǔ)
雖然流動(dòng)相制備可以基于體積比，但體積會(huì)隨著溫度的變化而變化，這會(huì)影響分離的準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性。因此，流動(dòng)相制備最好基于重量比，即使環(huán)境條件發(fā)生變化，重量比也能保持一致。
分別混合流動(dòng)相組分
如果根據(jù)體積進(jìn)行流動(dòng)相制備，則重要的是分別測(cè)量流動(dòng)相的組分，然后將它們合并。如果先測(cè)量水，并將有機(jī)溶劑加入到水中，溶劑混合物的收縮會(huì)增加其濃度。如果將水添加到溶劑混合物中，溶劑混合物的收縮將降低其濃度。
使用預(yù)混流動(dòng)相
混合流動(dòng)相的替代方法是使用預(yù)混流動(dòng)相。這在反相色譜中特別有用，因?yàn)樗兄诒苊饣旌线^(guò)程中的溫度變化，提高混合效率，并使混合物更有效地脫氣。
校正溶劑的溫度
當(dāng)依賴體積時(shí)，溶劑必須達(dá)到室溫，以確保體積一致和分析的重現(xiàn)性。這應(yīng)該通過(guò)將溶劑放入熱水或冷水浴中來(lái)完成，以適當(dāng)調(diào)節(jié)溶劑溫度所需的為準(zhǔn)。
選擇正確的過(guò)濾器
在制備過(guò)程中過(guò)濾流動(dòng)相時(shí)，選擇正確的濾光片類型非常重要。對(duì)于HPLC系統(tǒng)，建議使用孔徑為0.45μm或更小的膜式過(guò)濾器。對(duì)于UPLC系統(tǒng)，孔徑應(yīng)為0.22 μm或更小。這樣可以有效地去除流動(dòng)相中的顆粒，防止系統(tǒng)堵塞。
最終，您希望流動(dòng)相制備不僅正確，而且一致。這將確保分析的重現(xiàn)性，并保護(hù)您運(yùn)行的分離的完整性。
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