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如何選擇二抗

時(shí)間:2013-11-30閱讀:281
 抗體:是高等動(dòng)物在抗原物質(zhì)的刺激下由漿細(xì)胞產(chǎn)生的一類能與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合的免疫球蛋白??贵w通常存在于血清合淋巴(組織液)中。
單克隆抗體及多克隆抗體:由單一克隆的細(xì)胞(通常是單一克隆的雜交瘤細(xì)胞)所產(chǎn)生的識(shí)別某一抗原表位的單一抗體;多克隆抗體是由多種細(xì)胞分別接觸相應(yīng)抗原而產(chǎn)生的多種抗體的總和,多克隆抗體抗原識(shí)別抗原的多個(gè)表位。
抗體結(jié)構(gòu):抗體是由四條肽鏈構(gòu)成的“Y”形對(duì)稱的分子,包括兩條重鏈和兩條輕鏈。在“Y”的部位的氨基酸順序在不同的抗體分子中差別很大,是負(fù)責(zé)與抗原進(jìn)行特異性結(jié)合的區(qū)域,稱為可變區(qū),余下的區(qū)域則稱為恒定區(qū)。
如何選擇二抗?
通常情況下,某一特定的實(shí)驗(yàn)中可能同時(shí)有幾種二抗可供選擇,如何能選擇到該實(shí)驗(yàn)的二抗,需要綜合以下幾個(gè)方面進(jìn)行考慮:
一抗的物種來源
一抗是在什么物種來源的,相應(yīng)的二抗也要是抗該物種的抗體。例如,如果一抗是在小鼠體內(nèi)制備的,那么你就應(yīng)當(dāng)選擇抗小鼠的二抗,如果一抗是在兔體內(nèi)制備的,那么二抗就應(yīng)當(dāng)是抗兔的抗體。至于二抗本身是在什么動(dòng)物中制備的對(duì)二抗的質(zhì)量并無明顯的影響。
一抗是屬于哪個(gè)類或亞類
二抗需與一抗的類別或亞類相匹配。這通常是針對(duì)單克隆抗體而言。多克隆抗體主要是IgG類免疫球蛋白,因此相應(yīng)的二抗就是抗IgG抗體.
單克隆抗體的類別及亞類通常會(huì)在產(chǎn)品列表中列出,如果你的一抗是小鼠IgM,那么相應(yīng)的二抗就應(yīng)當(dāng)是抗小鼠IgM,或是抗小鼠IgG抗體。
如果單克隆一抗是小鼠IgG的某一亞類(IgG1,IgG2a,IgG2b,IgG3),那么幾乎所有的抗小鼠IgG都可以與之結(jié)合,或者你也可以選擇專門針對(duì)這一亞類的二抗,例如,如果你的一抗是小鼠IgG1,那么你可以選擇抗IgG1的二抗,此種抗體在雙標(biāo)記實(shí)驗(yàn)中尤其適合。
如果你不知道一抗是哪一類別或亞類,那么抗小鼠IgG是一個(gè)不錯(cuò)的選擇,因?yàn)榇朔N抗體可以識(shí)別大多數(shù)類型的IgG免疫球蛋白。

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