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當(dāng)前位置：> 供求商機(jī)> WB-0072-RIPA 組織 / 細(xì)胞裂解液（強(qiáng)）
所在地：北京
貨物所在地：北京北京市
更新時(shí)間：2024/11/27 8:46:38
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RIPA 組織 / 細(xì)胞裂解液 規(guī)格；50ml 編號(hào)；WB-0072
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一種傳統(tǒng)的細(xì)胞組織快速裂解液。
RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規(guī)的Western、IP等。
RIPA裂解液（強(qiáng)）的主要成分為50mM Tris(pH7.4)，150mM NaCl，1%Triton X-100，
1% sodium deoxycholate，0.1%SDS，以及sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA，
leupeptin等多種抑制劑?？梢杂行б种频鞍捉到?。
用RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品，可以用本公司生產(chǎn)的BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒測(cè)定蛋白濃度。
由于含有較高濃度的去垢劑，不能用Bradford法測(cè)定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。
包裝清單：
| RIPA裂解液（強(qiáng)） | 50ml（-20℃保存） |
| PMSF（100×） | 550ul（-20℃保存） |
| 使用說(shuō)明書 | 1份 |
使用說(shuō)明：
取出裂解液，待融化后顛倒混勻數(shù)次，適量分裝凍存。
在使用前取出PMSF(100mM)，按比例加入（使其zui終濃度為1mM）混勻，立即使用。
1、培養(yǎng)細(xì)胞：
（1）貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液，用PBS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液洗2-3遍
（如血清中的蛋白沒(méi)有干擾，也可以不洗）。
按6孔板每孔加入100-200ul的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。
通常裂解液接觸細(xì)胞數(shù)秒后細(xì)胞就會(huì)被裂解。
（2）懸浮細(xì)胞：收集培養(yǎng)細(xì)胞，離心去除培養(yǎng)液，用PBS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液洗2-3遍
（如血清中的蛋白沒(méi)有干擾，也可以不洗），
用手指把細(xì)胞用力彈散，按6孔板每孔細(xì)胞加入100-200ul的比例加入裂解液。
如果細(xì)胞數(shù)量較大，應(yīng)按50-100萬(wàn)細(xì)胞/管分裝或根據(jù)細(xì)胞數(shù)量按比例增加裂解液。
用手指輕彈管底以促進(jìn)裂解液和細(xì)胞充分接觸，裂解*時(shí)應(yīng)無(wú)明顯的細(xì)胞顆粒。
裂解物經(jīng)10,000-14,000g離心3-5min，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western、
免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
裂解液用量說(shuō)明：通常6孔板每孔細(xì)胞加入100微升裂解液已經(jīng)足夠，
但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到150微升或200微升。
2、組織樣品
取Ep管，分別稱重標(biāo)記，把組織剪切成小塊裝入Ep管中，稱重。
按每20mg組織加100-200ul的比例加入裂解液（如裂解不*，
可以適當(dāng)增加用量；如需要的蛋白樣品濃度較高，可以適當(dāng)減少用量）。
用手握式電動(dòng)組織細(xì)胞勻漿器勻漿約1min或直至充分裂解。
10,000-14,000g離心3-5min，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
如果組織樣品本身非常細(xì)小，如淋巴細(xì)胞，可直接加入裂解液，通過(guò)振蕩（Vortex）以使樣品裂解*。
保存條件：
PMSF需-20℃保存，裂解液若經(jīng)常使用，可于4℃保存至少三個(gè)月。若長(zhǎng)期保存，建議置于-20℃，可保存一年。
裂解液中含有少量SDS，溫度低會(huì)有沉淀析出，屬于正?，F(xiàn)象，使用時(shí)37℃加熱溶解即可。
注意事項(xiàng)：
1、為獲得*的實(shí)驗(yàn)效果，可適當(dāng)分裝使用，以盡量避免反復(fù)凍融。
2、PMSF應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)加。
3、裂解蛋白的所有步驟都需在冰上或4℃進(jìn)行。
4、蛋白酶抑制劑均有較高的毒性，為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
一旦直接接觸，請(qǐng)立即用流水沖洗，再向醫(yī)療保健結(jié)構(gòu)咨詢。
常見(jiàn)問(wèn)題分析：
細(xì)胞加入RIPA裂解液冰浴裂解后，離心,發(fā)現(xiàn)在液面附近有絮狀物產(chǎn)生，是什么原因？
答：一般是因?yàn)榧?xì)胞裂解不*造成的。
改善方法：
（1）加大裂解液的量和裂解時(shí)間。
（2）加入裂解液后冰浴稍微超聲處理，使其裂解*。
一般來(lái)說(shuō)，如果細(xì)胞裂解后變得澄清、不粘稠，這個(gè)時(shí)候再離心，就不會(huì)出現(xiàn)絮狀物了。
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