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北京鼎國(guó)昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司
中級(jí)會(huì)員·12年北京鼎國(guó)昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司
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當(dāng)前位置：> 供求商機(jī)> NEP062-鼎國(guó)自產(chǎn) 動(dòng)物組織 DNA 提取試劑盒
所在地：北京
貨物所在地：北京北京市
更新時(shí)間：2024/12/18 8:42:06
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鼎國(guó)自產(chǎn) 動(dòng)物組織 / 細(xì)胞 / 血液基因組 DNA 提取試劑盒
價(jià)格；350元
純化效果檢測(cè)
取2-5μl得到的DNA產(chǎn)物，0.7%agarose電泳檢測(cè)DNA分子的完整性和紫外分光光度計(jì)檢測(cè)濃度和純度。
DNA在260nm處有吸收峰，檢測(cè)時(shí)應(yīng)該使OD260值在0.1到1.0之間數(shù)值較準(zhǔn)確。
OD260為1時(shí)大概相當(dāng)于50μg/ml雙鏈DNA，40μg/ml單鏈DNA。
核酸濃度（μg/ml）=OD260×50×稀釋倍數(shù)。
OD260/OD280的值應(yīng)該為1.7~2.0。
常見問題分析：
| 常見問題 | 可能原因 | 建議 |
| 柱子堵塞 | 裂解消化不充分 | 適當(dāng)延長(zhǎng)Proteinase K消化時(shí)間。 |
| 樣品過多 | 樣品量不要超過說明書所定zui大量；可適當(dāng)增加Proteinase K的用量 | |
| DNA產(chǎn)量低 | 將沉淀倒入柱子導(dǎo)致柱子堵塞 | 加大轉(zhuǎn)速和延長(zhǎng)離心時(shí)間 |
| Wash buffer A、Wash buffer B沒有加無水乙醇 | 按說明書加入無水乙醇 | |
| 洗脫效率低 | 洗脫液使用前于55-65℃預(yù)熱；洗脫液pH值不合適，應(yīng)保證在7.5~8.5 | |
| 樣品裂解不* | 適當(dāng)延長(zhǎng)裂解時(shí)間。 | |
| 樣品不夠新鮮 | 盡量使用新鮮樣品 | |
| DNA純度低 | 消化不* | 樣品量不要超過規(guī)定范圍；延長(zhǎng)消化時(shí)間，使樣品充分消化 |
| 洗滌不當(dāng) | 嚴(yán)格按照說明書步驟洗脫 | |
| 乙醇未除干凈 | 適當(dāng)延長(zhǎng)晾干時(shí)間，使乙醇充分揮發(fā) |
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
本試劑盒采用自主研發(fā)的*裂解液和酶相結(jié)合的方法裂解材料，具有效率高、性能穩(wěn)定、
重復(fù)性高、速度快等特點(diǎn)。材料被裂解并、經(jīng)蛋白酶K消化后，DNA在高鹽低pH的條件下，
與硅基質(zhì)膜特異性結(jié)合，在低鹽高pH值條件下，吸附的DNA被洗脫下來。
本試劑盒適用于各種動(dòng)物組織、動(dòng)物細(xì)胞和血液基因組DNA的提取。
提取的基因組DNA可以直接用作PCR模板、酶切、雜交等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。
組成：
| 成分 | 50次 | 注意事項(xiàng) |
| RNase A | 0.5 ml | -20℃保存 |
| Proteinase K | 0.5 ml | -20℃保存 |
| Lysis Buffer A | 35 ml | 室溫低時(shí)可能有白色沉淀產(chǎn)生，加熱溶解即可 |
| Lysis Buffer B | 25 ml | |
| Wash buffer A | 27 ml | 用前加入18 ml 無水乙醇，充分混勻 |
| Wash buffer B | 16 ml | 用前加入64 ml無水乙醇，充分混勻 |
| Elution Buffer | 10 ml | |
| 離心柱 | 50個(gè) | 單個(gè)zui大吸附量20 μg |
| 紅細(xì)胞裂解液 | 50ml | 4℃ |
可選試劑
| 編號(hào) | 品名 | 規(guī)格 | 價(jià)格 |
| NEP033 | 紅細(xì)胞裂解液 | 100ml | 40.00 |
實(shí)驗(yàn)前試劑準(zhǔn)備
Wash buffer A中加入18 ml 無水乙醇，充分混勻。
Wash buffer B中加入64 ml無水乙醇，充分混勻。
儲(chǔ)存條件： 請(qǐng)按照上表中注意事項(xiàng)的條件保存，其他未說明的可常溫或4度保存。
步驟：
1、樣品處理
全血：取50-300 μl全血，加入3倍體積的紅細(xì)胞裂解液，震蕩混勻，12000rpm離心1min，
去上清。加入600 μl Lysis Buffer A，震蕩混勻。
禽血：加入10-100 μl禽血，直接加入600 μl Lysis Buffer A，顛倒混勻。
動(dòng)物組織：取20-50mg動(dòng)物組織，液氮研磨或勻漿，加入100 μl PBS重懸樣品，
然后加入到準(zhǔn)備好的600 μl Lysis Buffer A，振蕩混勻。
動(dòng)物細(xì)胞：離心收集105-106個(gè)培養(yǎng)細(xì)胞，加入100 μl PBS重懸細(xì)胞，
加入600 μl Lysis Buffer A，震蕩混勻。
2、 加入10 μl Proteinase K，60 ℃水浴20 min～40 min，其間顛倒混勻數(shù)次。
如需消化RNA,可待樣品裂解*后加入10 μl RNase A，混勻，室溫放置10 min。
若加入樣品較多，可適當(dāng)延長(zhǎng)水浴時(shí)間，適量增加Proteinase K的量，按比例增加
Lysis Buffer A和Lysis Buffer B量。
3、 加入400 μl Lysis Buffer B，漩渦震蕩30 s。
4、 12,000 rpm離心5 min，將上清轉(zhuǎn)入離心柱中，靜置2 min。
上清可能出現(xiàn)少量白色漂浮物，此為未消化*的細(xì)胞和蛋白質(zhì)。
5、 12,000 rpm離心1 min，棄廢液。
6、 加入700 μl Wash buffer A（使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇），12,000 rpm離心 1min，棄廢液。
7、 加入700 μl Wash buffer B（使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇）， 12,000 rpm離 心1min，棄廢液。
8、 加入500 μl Wash buffer B，12,000 rpm離心1 min，棄廢液。
9、 再次12,000 rpm離心2 min，將離心柱置于新的離心管中，并打開離心柱蓋，于室溫或37 ℃恒 溫箱放置5~10min，
直至無明顯乙醇味。
10、 在硅基質(zhì)膜*加入50～200 μl Elution Buffer或雙蒸水(事先預(yù)熱55～65 ℃)，置于室 溫2 min，12,000 rpm離2 min。
所得液體即為基因組DNA溶液。
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