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  • 適用于不同反應(yīng)體積的重組酶聚合酶等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)

    采用PCR或等溫?cái)U(kuò)增的方法來擴(kuò)增DNA(或RNA)時(shí),反應(yīng)溫度在50℃以上,反應(yīng)體積介于10-100ul之間,并且可能需要在樣品上覆蓋一層油性物質(zhì)或采取相似的封閉操作。這是因?yàn)椋诜磻?yīng)的過程中伴隨的蒸發(fā)現(xiàn)象致使反應(yīng)體積不可過小,另一方面,較大的反應(yīng)體積會消耗更多的耗材,并且在循環(huán)擴(kuò)增過程中無法有效的進(jìn)行溫度控制(達(dá)到預(yù)定的溫度需要較長的時(shí)間)。TwistDx’s提出的重組酶聚合酶擴(kuò)增(RPA)技術(shù)對這一難題給出了解決方案。重組酶聚合酶擴(kuò)增反應(yīng)可在低溫(通常在37-42℃,可以在更低溫度下進(jìn)行)下
  • pH的測定

    一、pH的定義溶液的酸堿性可用[H+]或[OH-]來表示,習(xí)慣上常用[H+]來表示。因此溶液的酸度就是指溶液中[H+]的大小。對于很稀的溶液,用[H+]來表示溶液的酸堿性往往既有小數(shù)又有負(fù)指數(shù),使用不方便,因此常用pH值來表示溶液的酸堿性。pH值是指氫離子濃度的負(fù)對數(shù),即pH=一lg[H+]例如:[H+]=10一7mol/L,pH=7;[H+]=10一9mol/L,pH=9;[H+]=10一3mol/L,Ph=3。pH值的使用范圍一般在0~14之間。pH值越小,溶液的酸性越強(qiáng),堿性越弱;pH值越
  • 采用 CRISPR/Cas9介導(dǎo)敲入技術(shù)構(gòu)建

    采用CRISPR/Cas9介導(dǎo)敲入技術(shù)構(gòu)建可量化生產(chǎn)蛋白質(zhì)的穩(wěn)定細(xì)胞系從植物標(biāo)本中提取的DNA是高度片段化的,因此提取短DNA分子的提取步驟非常嚴(yán)格。動物尸體DNA的提取方法和DNA文庫制備方法的改進(jìn),已經(jīng)能夠有效提取小于50bp的DNA分子片段。因此,德國科學(xué)家RafalM.Gutaker等將這些改進(jìn)方法應(yīng)用到植物標(biāo)本的DNA提取,并通過測序評估提取性能,該方法能夠?qū)NA片段長度的分布進(jìn)行準(zhǔn)確評估。與使用十六烷基*基溴化銨(CTAB)提取相比,使用N-笨甲酰溴(PTB)緩沖液提取的中間片段長
  • 導(dǎo)致PCR假陽性的污染源

    PCR反應(yīng)的特點(diǎn)是具有較大擴(kuò)增能力與*的靈敏性,但令人頭痛的問題是易污染,極其微量的污染即可造成假陽性的產(chǎn)生。一、標(biāo)本交叉污染源:收集標(biāo)本的容器:標(biāo)本放置時(shí),由于密封不嚴(yán)溢于容器外,或容器外粘有標(biāo)本而造成相互間交叉污染;吸樣槍:標(biāo)本核酸模板在提取過程中,由于污染導(dǎo)致標(biāo)本間污染;氣溶膠:zui可能造成PCR產(chǎn)物污染的形式。在空氣與液體面摩擦?xí)r就可形成氣溶膠,在操作時(shí)比較劇烈地?fù)u動反應(yīng)管,開蓋時(shí)、吸樣時(shí)及污染進(jìn)樣槍的反復(fù)吸樣都可形成氣溶膠而污染。據(jù)計(jì)算一個(gè)氣溶膠顆粒可含48000拷貝,因而由其造成的
  • 植物標(biāo)本超短DNA分子的提取

    從植物標(biāo)本中提取的DNA是高度片段化的,因此提取短DNA分子的提取步驟非常嚴(yán)格。動物尸體DNA的提取方法和DNA文庫制備方法的改進(jìn),已經(jīng)能夠有效提取小于50bp的DNA分子片段。因此,德國科學(xué)家RafalM.Gutaker等將這些改進(jìn)方法應(yīng)用到植物標(biāo)本的DNA提取,并通過測序評估提取性能,該方法能夠?qū)NA片段長度的分布進(jìn)行準(zhǔn)確評估。與使用十六烷基*基溴化銨(CTAB)提取相比,使用N-笨甲酰溴(PTB)緩沖液提取的中間片段長度減少35%,改進(jìn)DNA與硅膜的結(jié)合條件可以額外減少10%。他們并未觀
  • 基因的PCR擴(kuò)增和DNA熔解分析

    TaqMan探針作為阻斷劑參與突變基因的PCR擴(kuò)增和DNA熔解分析含TaqMan探針的非對稱PCR以及DNA熔解分析被應(yīng)用于突變檢測,可有效用于臨床診斷。該方法簡單、成本低,在一個(gè)封閉的離心管中進(jìn)行,可zui大限度的減少反應(yīng)時(shí)間,減輕工作量,以及避免樣品間的交叉污染。盡管DNA熔解分析比DNA常規(guī)測序更加靈敏(兩者的突變檢測閾值分別為~5%和15%~20%),但相比與那些工作量大且昂貴的生物技術(shù),如焦磷酸測序和微滴型數(shù)字PCR而言,其靈敏度相差甚遠(yuǎn)。IrinaV.Botezatu等科學(xué)家證明,在
  • 培養(yǎng)基的分類

    一、化學(xué)分類:1.天然培養(yǎng)基,指一類利用動、植物或微生物體包括其提取物制成的培養(yǎng)基。2.組合培養(yǎng)基,又稱為合成培養(yǎng)基或綜合培養(yǎng)基,是一類按微生物的營養(yǎng)要求設(shè)計(jì)后用多種高純化學(xué)試劑配制成的培養(yǎng)基。如葡萄糖銨鹽培養(yǎng)基、淀粉硝酸鹽培養(yǎng)基等。3.半組合培養(yǎng)基,指一類主要以化學(xué)試劑配制,同時(shí)還加有某種或某些天然成分的培養(yǎng)基。例如,馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基。二、物理分類:1.固體培養(yǎng)基,一類外觀呈固態(tài)的培養(yǎng)基。根據(jù)性質(zhì)又分為固化培養(yǎng)基、非可逆性固化培養(yǎng)基、天然固態(tài)培養(yǎng)基、濾膜。2.液體培養(yǎng)基,一類呈液態(tài)的培養(yǎng)基。3
  • 分層細(xì)胞膜微區(qū)調(diào)節(jié)細(xì)胞因子信號傳導(dǎo)從而影響受體二聚體的穩(wěn)定性

    信號分子復(fù)合物動力學(xué)的結(jié)果顯示,信號分子復(fù)合物是調(diào)控細(xì)胞免疫特異性的關(guān)鍵。ChangjiangYou等科學(xué)家提出了一種實(shí)驗(yàn)結(jié)合計(jì)算的研究方法,通過對細(xì)胞膜微區(qū)測量結(jié)果的量化構(gòu)建了I型干擾素受體復(fù)合物動力學(xué)。通過長期的雙色量子點(diǎn)(QD)示蹤,他們發(fā)現(xiàn)單個(gè)由配體誘導(dǎo)產(chǎn)生的受體異源二聚體的壽命取決于細(xì)胞膜骨架(MSK)的完整性,這一點(diǎn)被證明對有效的下游信號也是至關(guān)重要的。通過成對關(guān)聯(lián)示蹤,定位顯微鏡以及快速量子點(diǎn)示蹤,識別了一個(gè)在300nm范圍內(nèi)的第二限制。基于實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),將一個(gè)定量空間隨機(jī)擴(kuò)散反應(yīng)模型
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