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分光光度法(2005年版藥典一部)

點擊次數(shù):3991 發(fā)布時間:2013-12-12

分光光度法是通過測定被測物質在特定波長處或一定波長范圍內(nèi)的吸光度或發(fā)光強度,對該物質進行定性和定量分析的方法。

常用的波長范圍為:(1)200~400nm的紫外光區(qū);(2)400~760nm的可見光區(qū), (3)2.5~25μm(按波 數(shù)計為4000~400cm<-1>)的紅外光區(qū)。所用儀器為紫外分光光度計、可見分光光度計(或比色計)、紅外分光光度計原子吸收分光光度計
為保證測量的精密度和準確度,所用儀器應按照國家計量檢定規(guī)程或本附錄規(guī)定,定期進行校正檢定。
單色光輻射穿過被測物質溶液時,在一定的濃度范圍內(nèi)被該物質吸收的量與該物質的濃度和液層的厚度(光路長度)成正比,其關系如下式:
           1
A=1g ─ =ECL
           T
式中 A 為吸光度;
T 為透光率;
E 為吸收系數(shù),采用的表示方法是(E1% 1cm),其物理意義為當溶液濃度為1%(g/ml),液層厚度為1cm時的吸光度數(shù)值;
C 為100ml溶液中所含被測物質的重量(按干燥品或無水物計算),g;
L 為液層厚度,cm。
物質對光的選擇性吸收波長,以及相應的吸收系數(shù)是該物質的物理常數(shù)。當已知某純物質在一定條件下的吸收系數(shù)后,可用同樣條件將該供試品配成溶液,測定其吸收度,即可由上式計算出供試品中該物質的含量。在可見光區(qū),除某些物質對光有吸收外,很多物質本身并沒有吸收,但可在一定條件下加入顯色試劑或經(jīng)過處理使其顯色后再測定,故又稱比色分析。

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