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技術(shù)文章

化學(xué)發(fā)光技術(shù)

閱讀:974          發(fā)布時間:2011-6-15

放射免疫分析法有很高的靈敏度,但存在著放射性防護和同位素污染等問題。近年來,許多非放射性同位素標記的免疫分析方法相繼出現(xiàn)。其中,在化學(xué)發(fā)光反應(yīng)及抗原-抗體特異性識別基礎(chǔ)上建立起來的一種新的非放射免疫分析技術(shù)--化學(xué)發(fā)光免疫分析法,由于這種方法具有靈敏度高,特異性強,精密度好,線性范圍寬,儀器設(shè)備簡單,試劑價格低廉,方法穩(wěn)定、快速等優(yōu)點,已成為一種重要的非同位素標記免疫學(xué)檢測方法。

把化學(xué)發(fā)光物質(zhì)與免疫學(xué)反應(yīng)結(jié)合起來,用光反應(yīng)表現(xiàn)被測的免疫成分濃度,即把高靈敏的光反應(yīng)與特異性的免疫學(xué)反應(yīng)相結(jié)合的方法,稱為化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)。

化學(xué)發(fā)光技術(shù)是將發(fā)光物質(zhì)(如吖啶酯、魯米諾等)標記抗原或抗體進行反應(yīng),發(fā)光物質(zhì)在反應(yīng)劑(如過氧化陰離子)激發(fā)下生成激發(fā)態(tài)中間體,當激發(fā)態(tài)中間體回到穩(wěn)定的基態(tài)時發(fā)射出光子,用自動發(fā)光分析儀接收光信號,測定光子產(chǎn)量,以反映待檢樣品中抗體或抗原含量?;瘜W(xué)發(fā)光免疫分析方法的檢測靈敏度要遠遠高于ELISA、熒光免疫等,而優(yōu)于或與同位素檢測相當;在使用方便性上,化學(xué)發(fā)光與傳統(tǒng)ELISA方法一樣簡單易用;在對人體和環(huán)境的危害上,化學(xué)發(fā)光對此沒有任何擔(dān)憂。

目前,越來越多的免疫檢測項目通過化學(xué)發(fā)光免疫檢測來進行,以代替?zhèn)鹘y(tǒng)的ELISA和放射免疫分析法。

化學(xué)發(fā)光免疫分析包括三大類型:標記化學(xué)發(fā)光物質(zhì)的化學(xué)發(fā)光免疫分析、標記熒光物質(zhì)的熒光化學(xué)發(fā)光免疫分析和標記酶的化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫分析。

zui近的一些分子生物學(xué)進展使得一些生物技術(shù)工具極大提高了生物發(fā)光和化學(xué)發(fā)光的檢測和快速應(yīng)用。生物發(fā)光和化學(xué)發(fā)光(BL/CL)的主要特點就在于發(fā)光信號的高度可測性,可以用PMT(光電倍增管)和CCD成像系統(tǒng)來檢測極少量的光子信號。BL是屬于CL范疇之內(nèi),CL反應(yīng)的特點是高光子產(chǎn)生效率,BL為0.5~0.8,CL為0.1-0.001。因此BL/CL的檢測極限可以達到10-21~10-18mol,這顯然要比其他的光學(xué)技術(shù)強得多。BL/CL已經(jīng)廣泛的應(yīng)用到免疫檢測中進行標記物的超靈敏檢測。

CL免疫檢測不但可以通過以CL分子直接標記抗原或抗體,也可以以CL底物標記可被檢測的酶。相比同位素檢測,CL檢測以其更加靈敏和可檢測性獲得越來越多的應(yīng)用。

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