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深圳市科潤(rùn)達(dá)生物工程有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第17年

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兒茶酚胺檢測(cè)試劑盒操作流程是怎樣的?

時(shí)間:2021/5/25閱讀:839
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   兒茶酚胺檢測(cè)試劑盒是重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室為科研研究的*品5-羥色胺ELISA檢測(cè)試劑盒,在生物分子領(lǐng)域得到長(zhǎng)足的發(fā)展及火爆的人氣。兒茶酚胺檢測(cè)試劑盒可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)的需求與目的來計(jì)算曲線,每次實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)曲線一般設(shè)7個(gè)不同濃度,加上空白孔,標(biāo)準(zhǔn)曲線一共需要8個(gè)孔。因此,一個(gè)48T試劑盒最多可以測(cè)定40個(gè)樣本(不做重復(fù)且一次用完),一個(gè)96T試劑盒最多可以測(cè)定88個(gè)樣本(不做重復(fù)且一次用完)。
  操作流程如下:
  1待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl,每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔;設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔,每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl;另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔,加入純細(xì)胞裂解液100μl。
  2酶標(biāo)板置4℃,包被過夜。
  3洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過洗一遍將洗滌液注滿板孔后,即甩去,之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
  4陰性對(duì)照孔每孔加入pbs 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人aif抗體工作液50μl。
  5酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
  6洗板,同4。
  7每孔加1:5000稀釋的hrp-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
  8酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
  9洗板,同4。
  10每孔加tmb顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
  11每孔加100μl 2mol/l h2so4終止反應(yīng)。
  12分別測(cè)450nm 吸光值w1和630nm吸光值w2,終測(cè)得的od值為兩者之差w1-w2,以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
  13數(shù)據(jù)處理:在得出標(biāo)本s和陰性對(duì)照n的 od值后,計(jì)算s/n值。s/n***2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)。

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